5個男性不育候選基因的遺傳多態(tài)性及其與疾病的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、男性不育是一種復(fù)雜疾病，其涉及的遺傳因素眾多。近年來，對原發(fā)男性不育的遺傳病因進(jìn)行了廣泛的研究，相繼發(fā)現(xiàn)了一些可導(dǎo)致男性不育遺傳缺陷，如染色體異常、Y染色體無精癥因子(azoospermia factor，AZF)區(qū)的微缺失、某些己知基因的突變等。但這些因素只能解釋約15％的病例。因此，仍有眾多的男性不育發(fā)病的相關(guān)基因有待于闡明。 在原發(fā)男性不育患者中，精子發(fā)生障礙是主要的類型，大約有59-90％的患者為無精癥或嚴(yán)重寡精癥。因此

2、，與精子發(fā)生密切相關(guān)的那些基因也被認(rèn)為是原發(fā)男性不育的主要候選基因。人類的精子發(fā)生是一個及其復(fù)雜的過程，涉及細(xì)胞增殖、減數(shù)分裂、細(xì)胞分化等一系列細(xì)胞活動。據(jù)估計，至少有4000多個基因參與精子發(fā)生過程。近年來，隨著研究的不斷深入，已鑒定了許多與精子發(fā)生密切相關(guān)的基因。但這些基因是否都與原發(fā)男性不育相關(guān)，目前還不清楚，尚需進(jìn)一步的研究。 人類乳腺癌易感基因2(breast cancer susceptibilitv gene 2，

3、BRCA2)、重組蛋白A(recombinationproteinA，RAD51)基因、亞甲基四氫葉酸還原酶(Methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)基因、促性激素調(diào)節(jié)的睪丸RNA解旋酶(Gonadotropin-regulated testicular RNA helicase，GRTH)基因、細(xì)胞周期素Al(cyclin Al，CCNAl)基因在精子發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。近年來，對這幾個

4、基因所進(jìn)行的一系列研究提示，它們可能與原發(fā)男性不育的病理發(fā)生有關(guān)。目前，國內(nèi)外均尚未有有關(guān)BRCA2、RAD51、GRTH、CCNAl與原發(fā)男性不育關(guān)系的研究報道。對MTHFR的研究顯示，其對原發(fā)男性不育的易感性影響存在種族差異，至今還未有中國人群的資料。 有鑒于此，為初步了解上述5個基因與男性不育的關(guān)系，本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)、變性高效液相色譜(DHPLC)和DNA測序等技術(shù)，在34

5、7例原發(fā)男性不育患者和252正常生育男性中，對BRCA2基因N372H、RAD51基因的135G／C和MTHFR基因的677C／T等三個常見的單核苷酸多態(tài)(single nucleotidepolymorphism，SNP)位點的頻率分布進(jìn)行了研究。同時，還對GRTH和CCNAl基因進(jìn)行了系統(tǒng)的突變分析。其結(jié)果如下： 1．BRCA2基因的SNP N372H的等位基因H的頻率在男性不育患者中顯 著高于正常生育男性個體(26.3％

6、VS．17.7％，X<'2>=6.252，P=0.012， OR=1.442，95％CI=1.082～1.925)；與正常男性相比較，男性不育患 者中帶有H等位基因的個體(NH+HH)顯著增加(41.8％VS．32.5％， X<'2>=5.304，P=0.021，OR=I.488，95％CI=1.060～2.089)。 2．原發(fā)男性不育患者中RAD51基因的SNP 135G／C的等位基因G和C 的頻率與正常生育男性無顯著

7、性差異(P>0.05)；也沒有發(fā)現(xiàn)兩組人 群間基因型頻率存在顯著差異(P>O.05)。 3．MTHFR基因的SNP 677C／T的等位基因T的頻率，在原發(fā)男性不育 患者中顯著高于正常對照組(40.3％VS．30.4％，X<'2>=12.622，P=0.0004， OR=1.552，95％CI=1.217～1.978)；患者組的突變純合子(TT)(18.4％ vs．11.5％，x<'2>=5.355，P=0.021，OR=

8、1.739，95％CI=1.084～2.790)和帶 有T等位基因的個體(TT+TC) (62.3％VS．49.2％，X<'2>=10.11，P=0.002， OR=I.702．95％CI=1.225～2.365)也顯著高于正常男性。 4．對GRTH基因的12個外顯子及其與內(nèi)含子的鄰接區(qū)的突變篩查，發(fā) 現(xiàn)四個SNP，即ISV6+55G>T,ISV8+10A>C，c.852C>T和c.927G>A。 其中ISV8+10A

9、>C和c.927G>A是新發(fā)現(xiàn)的SNPs。在ISV6+55G>T 位點，男性不育患者的等位基因T(13.7％VS．8.7％，X<'2>=6.999，P=0.008，OR=1.659．95％CI=1.137～2.419)、雜合子(GT)(25.6％VS.15.9％， X<'2>=8.150，P=0.004，OR=1.804，95％CI=1.199～2.713)和帶有T等位基 因的個體(GG+GT)(26.5％vs.16.7％，X<'

10、2>=4.745，P=0.029，OR=1.436， 95％CI=1.036～1.998)的頻率與正常對照相比較，均有顯著性增加。 在男性不育患者中，c.852C>T的等位基因T的頻率(31.4％vs.25.2％， X<'2>=5.498，P=0.019，OR=1.360，95％CI=1.051～1.758)和帶有T等位基 因的個體(CT+TT)的頻率(55％vs.46％，X<'2>=4.745，P=0.029，OR=1.

11、436， 95％CI=1.036～1.998)也顯著高于正常對照組。進(jìn)一步用PHASE軟件 對ISV6+55G>T和c.852C>T組成的單倍型進(jìn)行的分析顯示，這兩個 位點的單倍型分布與原發(fā)男性不育的易感性相關(guān)(P=0.02)。 ISV8+10A>C和c.927G>A位點的多態(tài)性分布在兩組人群中沒有顯 著性差異(P>0.05)。 5．對CCNAl基因9個外顯子及其與內(nèi)含子的鄰接區(qū)的突變篩查，發(fā)現(xiàn)四個變異，即c.321T

12、>C、ISV3+32G>C、ISV5+38A>G和c.1158G>A。其中，c.321T>C、ISV5+38A>G和c.1158G>A是新發(fā)現(xiàn)的變異。上述四個變異的發(fā)生的頻率均比較低，而且都與男性不育的發(fā)病易感性不相關(guān)。 上述研究結(jié)果表明，BRCA2基因N372H和MTHFR基因的677C／T位點的多態(tài)性與原發(fā)男性不育的易感性相關(guān)，而RAD51基因的135G／C則不相關(guān)。突變分析結(jié)果提示，GRTH基因可能是原發(fā)男性不育發(fā)病相關(guān)基