精漿葉酸水平及葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性與男性不育的相關(guān)性研究.pdf

1、男性不育是由環(huán)境因素和遺傳因素綜合所致的復(fù)雜疾病，排除臨床上常規(guī)檢查能獲知的病因外，仍有約40％的患者不育原因尚不清楚。由于無法對“癥”下藥，該部分患者臨床治療效果并不理想，因此輔助生殖技術(shù)成為其得到后代的首選。但是，輔助生殖技術(shù)并不能揭示發(fā)病原因，而且還存在致病基因垂直傳播的可能。因此只有從包括營養(yǎng)因素在內(nèi)的環(huán)境和遺傳雙重角度揭示發(fā)病機(jī)理，尋找致病/易感基因，才是治療和預(yù)防男性不育的根本所在。葉酸作為一種營養(yǎng)因素，可有效預(yù)防新生兒神經(jīng)

2、管閉合缺陷的發(fā)生，在很多國家已經(jīng)成為育齡女性的必補(bǔ)品。但是關(guān)于葉酸在男性生殖中的報(bào)道卻十分有限。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，用葉酸缺乏的飲食飼養(yǎng)大鼠或小鼠，可導(dǎo)致其精子密度和活力下降；葉酸代謝過程中的限速酶—亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)在小鼠睪丸中的活性是其他組織的5倍，MTHFR基因敲除小鼠表現(xiàn)為嚴(yán)重的生精障礙和雄性不育。目前，在人類精漿和前列腺中己發(fā)現(xiàn)有高親和力的葉酸結(jié)合蛋白，精漿中葉酸的濃度是血漿中的1．5倍，而且適當(dāng)補(bǔ)充葉酸可明顯改善精

3、液質(zhì)量。這一系列實(shí)驗(yàn)提示：葉酸和葉酸代謝循環(huán)在男性生殖中發(fā)揮重要作用。鑒于此，我們檢測了500份精漿(包括精子密度正常的個(gè)體285例和少精癥患者215例)中葉酸的含量，并分析了葉酸代謝相關(guān)基因MTHFR，MS(蛋氨酸合成酶編碼基因)和TYMS(胸腺嘧啶核苷酸合成酶編碼基因)在正常已育人群和男性不育患者中的多態(tài)性分布。本研究分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：經(jīng)過嚴(yán)格篩選，我們收集并篩選到少精癥患者精漿215份，精子密度正常個(gè)體精漿2

4、85份。采用微生物法檢測了精漿總?cè)~酸和非甲基四氫葉酸的濃度，發(fā)現(xiàn)總?cè)~酸在嚴(yán)重少精癥患者和精子密度正常個(gè)體中存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0．047)，但是非甲基四氫葉酸濃度在患者組與對照組中沒有差異。同時(shí)，我們分析了對照組與患者組精漿鋅濃度，發(fā)現(xiàn)無精癥患者鋅濃度高于對照組，兩者具有顯著性差異(p=0．004)。分析血漿HCY發(fā)現(xiàn)，HCY在患者組與對照組中沒有差異。
　　 第二部分：經(jīng)過嚴(yán)格篩選，我們排除了臨床病因已知的患者血樣，共收集臨床

5、原因不明男性不育患者血樣491例和正常已育男性血樣430例。應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)—限制性酶切片段長度多態(tài)性(PCR—RFLP)的方法研究了MTHFR基因C677T位點(diǎn)和A1298C位點(diǎn)，MS基因A2756G位點(diǎn)以及TYMS3’UTR端缺失/插入位點(diǎn)的多態(tài)性分布，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：對于C677T位點(diǎn)來說，等位基因T在患者組中的分布頻率為65．47％，在對照組中為55％，兩者具有顯著差異(p<0．001)?；蛐头治霰砻?，純合突變基因型TT、雜合基因

6、型CT以及整合后的基因型CT+TT在患者組和正常對照組表現(xiàn)出極顯著差異(均為p<0．001)，提示MTHFR基因C677T位點(diǎn)可能作為男性不育的風(fēng)險(xiǎn)位點(diǎn)。對于A1298C來說，等位基因C的分布頻率在患者組和對照組中具有極顯著差異(p<0．001)；基因型分析表明，純合突變基因型CC、雜合突變基因型AC以及整合后的基因型在患者組和對照組同樣具有極顯著性差異(均為p<0．001)，提示MTHFR基因A1298C位點(diǎn)可能是男性不育的風(fēng)險(xiǎn)位點(diǎn)。

7、因?yàn)镸THFR基因C677T位點(diǎn)和A1298C位點(diǎn)均與男性不育表現(xiàn)出相關(guān)性，所以我們對這兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行了聯(lián)合分析，分析結(jié)果顯示，兩個(gè)位點(diǎn)具有聯(lián)合作用，隨著等位基因突變個(gè)數(shù)增多，患病的風(fēng)險(xiǎn)就會(huì)增大(P<0．001)。分析MTHFR基因C677T位點(diǎn)和A1298C位點(diǎn)構(gòu)成的單倍型時(shí)發(fā)現(xiàn)，677T/1298A和677C/1298A分別為患者和正常組的常見單倍型。單倍型677T/1298C和677C/1298C在患者組與正常對照組間有極顯著性差異