亞低溫對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧-復(fù)氧后AQP4、AQP5表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]：觀察缺氧／復(fù)氧條件下星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4、AQP5的表達(dá)變化以及亞低溫對(duì)其表達(dá)變化的影響，探討腦缺血再灌注腦水腫與AQP4、AQP5的關(guān)系以及亞低溫對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制。 [方法]：利用新生24小時(shí)內(nèi)的SD大鼠，取皮層新鮮腦組織，經(jīng)機(jī)械分離和化學(xué)消化，制作細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為5×10<'5>／cm<'2>，接種到含胎牛血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置培養(yǎng)箱中進(jìn)行原代培養(yǎng)，利用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)及分化的形態(tài)學(xué)變化

2、。培養(yǎng)8-9天后傳代，當(dāng)傳至第3代，細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定，自然純化后，神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glia fibrillary acid protein，GFAP)免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞，95％以上為陽(yáng)性細(xì)胞，符合實(shí)驗(yàn)要求。將星形膠質(zhì)細(xì)胞分為正常對(duì)照組(C)、常溫缺氧／復(fù)氧組(H／R)、亞低溫干預(yù)缺氧／復(fù)氧組(M+H／R)。用三氣培養(yǎng)箱分別調(diào)節(jié)溫度37℃及32℃，以95％N<，2>和5％CO<,2>造成細(xì)胞缺氧，用臺(tái)盼藍(lán)染色法測(cè)定37℃及

3、32℃時(shí)，缺氧／復(fù)氧不同時(shí)間點(diǎn)AC的存活率，作為細(xì)胞受損指標(biāo)，用倒置相差顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，應(yīng)用細(xì)胞免疫化學(xué)技術(shù)檢驗(yàn)缺氧／復(fù)氧各個(gè)時(shí)間點(diǎn)AQP4、AQP5的表達(dá)變化及亞低溫的干預(yù)效果。 [結(jié)果]： 1．體外培養(yǎng)的AC傳3代后，細(xì)胞胞體較大而扁，形狀不規(guī)則，細(xì)胞突起較多較長(zhǎng)，呈放射狀。GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞胞漿呈棕黃色。 2．37℃缺氧8小時(shí)后，細(xì)胞的形態(tài)、存活力變化不明顯，部分細(xì)胞邊緣皺

4、縮。隨著復(fù)氧時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞變化逐漸明顯，細(xì)胞損傷表現(xiàn)明顯加強(qiáng)，表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹、變圓、輪廓不清，突起增粗縮短，細(xì)胞間連接斷裂，逐漸出現(xiàn)細(xì)胞死亡、崩解、胞體漂浮。細(xì)胞存活力下降，呈明顯的時(shí)效關(guān)系。32℃干預(yù)時(shí)大部分細(xì)胞輪廓較清晰，胞周光暈明顯，突起存在，僅有少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)分離現(xiàn)象。細(xì)胞存活力較缺氧／復(fù)氧組增加。 3．細(xì)胞免疫化學(xué)的半定量方法觀察AQP4、AQP5的表達(dá)發(fā)現(xiàn)：37℃正常氧供時(shí)AQP4、AQP5位于細(xì)胞膜上的表達(dá)無(wú)明顯變

5、化；37℃缺氧8小時(shí)，AQP4陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)減少，AQP5陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)也減少。而復(fù)氧后AQP4、AQP5陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)升高并隨時(shí)間延長(zhǎng)呈增高趨勢(shì)。與對(duì)照組相比差異有顯著性(p<0.01，p<0.05)。 4．32℃干預(yù)缺氧／復(fù)氧時(shí)AQP4、AQP5陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均較37℃缺氧／復(fù)氧組減少(p<0.01，p<0.05)。 [結(jié)論]： 1．星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)缺氧的耐受能力較強(qiáng)，復(fù)氧后細(xì)胞損害隨著時(shí)間延長(zhǎng)明顯