凍融抗原負(fù)載的樹突狀細(xì)胞抗子宮內(nèi)膜癌的體內(nèi)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:目前,手術(shù),化療和放療是腫瘤治療的3大手段,這些手段均不能消滅最后一個殘留的癌細(xì)胞,而生物治療最有希望達(dá)到這一目標(biāo)。 近年來,開展DC細(xì)胞作為腫瘤生物治療和基因治療的方案已經(jīng)獲得FDA標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)入Ⅲ期臨床,該療法比傳統(tǒng)的LAK細(xì)胞治療和CIK細(xì)胞療法更有特異性,以及更強(qiáng)大的殺瘤活性。但子宮內(nèi)膜癌樹突狀疫苗的研究國內(nèi)外鮮有報道。 由于目前子宮內(nèi)膜癌的腫瘤特異性抗原不明確,應(yīng)用全細(xì)胞性腫瘤抗原沖擊致敏DC的方法來制備樹突狀

2、疫苗不失為一種簡便而有效的方法。 本研究目的在于觀察人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa凍融抗原致敏的人臍帶血單核細(xì)胞來源的DC活化的CTL對裸鼠移植瘤的預(yù)防和治療作用,并對其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。 方法: 1.分離正常足月產(chǎn)婦分娩后新生兒臍血單個核細(xì)胞(MNCs),加入含細(xì)胞因子rhGM-CSF、rhIL-4的培養(yǎng)劑常規(guī)培養(yǎng),每3天半量換液1次,補(bǔ)全量細(xì)胞因子。第3天向DC誘導(dǎo)體系中按照1:10的細(xì)胞比例加入Is

3、hikawa凍融抗原,第五天加入TNF-α。第7天收集細(xì)胞;與分離的T淋巴細(xì)胞按照1:10的比例混合培養(yǎng)3天。倒置顯微鏡下觀察樹突狀細(xì)胞以及T淋巴細(xì)胞形態(tài)。 2.將30只裸鼠隨機(jī)選擇15只,收集處于對數(shù)生長期(logarith-mic growth phase)的細(xì)胞系Ishikawa,建立裸鼠子宮內(nèi)膜癌皮下移植瘤模型。選擇腫瘤體積長至100mm<'3>的10只裸鼠,在瘤旁皮下分別注射DC活化的CTL、凍融抗原活化的CTL及完全

4、培養(yǎng)基,每7天接種1次,連種3次。每4天測量一次移植瘤大小,并以公式V=1/6πabc計算腫瘤體積(abc為腫瘤互相垂直的直徑),繪制移植瘤生長曲線。 3.從余下的15只裸鼠中隨機(jī)分為3組,每組5只,分別于左側(cè)背部皮下接種DC活化的CTL、凍融抗原活化的CTL 及完全培養(yǎng)基。3天后將對數(shù)生長期的細(xì)胞系:Ishikawa接種于這兩組裸鼠的右側(cè)背部皮下:每4天觀察一次裸鼠移植瘤的形成情況,并以公式V=1/6πabc計算移植瘤體積(

5、V為體積,abc為腫瘤互相垂直的直徑),直到接種后第20天。 4.鏡下觀察各治療組Ishikawa移植瘤標(biāo)本的形態(tài):透射電子顯微鏡下觀察Ishikawa移植瘤標(biāo)本腫瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。 5.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測DC活化的CTL組和凍融抗原活化的CTL組以及治療組對照組Ishikawa移植瘤的凋亡率。 6.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測DC活化的CTL組和凍融抗原活化的CTL組以及治療組對照組Ishikawa移植瘤細(xì)胞中Fas膜蛋

6、白的表達(dá)。 7.應(yīng)用免疫組化SP法檢測DC活化的CTL和凍融抗原活化的CTL組以及治療組空白對照組Ishikawa移植瘤組織中Survivin的表達(dá)。 結(jié)論: 1.Ishikawa凍融抗原負(fù)載的DC活化的CTL比單純凍融抗原活化CTL形成的集落大,且增殖快。表明DC能高效地遞呈抗原,促進(jìn)特異性T淋巴細(xì)胞的增殖。 2.Ishikawa凍融抗原負(fù)載的DC活化的CTL能有效抑制裸鼠Ishikawa 移植瘤的生長

7、,且抑制作用與接種次數(shù)有關(guān)。 3.Ishikawa凍融抗原負(fù)載的DC活化的CTL對于較小的裸鼠皮下移植瘤的治療效果較大的移植瘤明顯,表明樹突狀疫苗更適用于微小病變。 4.Ishikawa凍融抗原負(fù)載的DC活化的CTL能夠誘導(dǎo)Ishika-wa細(xì)胞凋亡。 5.DC能夠上調(diào)Ishikawa腫瘤細(xì)胞Fas膜蛋白的表達(dá),這可能是誘導(dǎo)Ishikawa移植瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一。 6.DC可能通過下調(diào)凋亡抑制基因Su

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