負載凋亡腫瘤細胞抗原的樹突狀細胞疫苗對小鼠膀胱癌的抑制作用.pdf

1、目的：樹突狀細胞(dendritic cell,DC)是迄今為止所知道的抗原遞呈功能最強的專職抗原遞呈細胞(antigen presenting cell，APC)，也是唯一可以激活初始免疫反應(yīng)的APC，在對腫瘤產(chǎn)生主動免疫上起著重要的作用。樹突狀細胞瘤苗的制備與應(yīng)用成為了腫瘤免疫治療的研究熱點。本實驗研究輻射凋亡腫瘤細胞誘導(dǎo)的DC疫苗的制備及對C57BL/6小鼠負載膀胱腫瘤的免疫學(xué)效應(yīng)。
　　方法：采用輻射法獲取MB49細胞抗原

2、并用其致敏骨髓來源的DC來制備DC疫苗。DC采用骨髓分離法從C57BL/6小鼠骨髓中分離細胞，接種于含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，加入重組鼠粒巨噬細胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重組鼠白細胞介素4(rmIL-4)，體外誘導(dǎo)培養(yǎng)為未成熟DC，于第6天分別加入經(jīng)輻射獲取的凋亡的MB49小鼠膀胱癌細胞，刺激使其成熟，制備膀胱腫瘤疫苗。觀察其形態(tài)同時流式細胞儀檢測各組成熟DC表面分子CD80、CD86的表達情況。用MB49小

3、鼠膀胱癌細胞建立荷瘤動物模型，隨機分為實驗組和實驗對照組，于腫瘤細胞接種后第7、14天給予相應(yīng)DC疫苗治療或者PBS，每組分2亞組，分別用于測量瘤質(zhì)量、體積及用于觀察荷瘤小鼠存活情況。
　　結(jié)果：經(jīng)鑒定建立的以DC為基礎(chǔ)的膀胱腫瘤疫苗具有典型DC形態(tài)學(xué)和表型特征。DC疫苗擴增到第5天，通過檢測表面抗體顯示CD11c高表達，但是CD80，CD86以及I-A低表達，提示為未成熟DC細胞。加入LPS共同培養(yǎng)后第7天通過檢測CD80，CD

4、86以及I-A提示DC細胞成熟。培養(yǎng)至第5天的小鼠骨髓來源的未成熟DC和經(jīng)照射獲得的凋亡小鼠膀胱癌細胞及無血清共培養(yǎng)1天后，經(jīng)過流式細胞儀測定顯示未成熟DC細胞成為成熟的DC細胞。經(jīng)過X射線照射三天后腫瘤細胞的凋亡達到最佳數(shù)目。負載輻射凋亡腫瘤細胞抗原的DC疫苗實驗組荷瘤鼠腫瘤平均體積和平均瘤質(zhì)量均顯著低于對照組(P＜0.01)，生存期長于對照組，并且有2只小鼠無瘤長期存活。經(jīng)DC疫苗實驗組治愈的2只小鼠30天后無腫瘤生長，再次皮下接種

5、MB49細胞觀察30天仍無腫瘤發(fā)生。
　　結(jié)論：DC是功能最強大的抗原提呈細胞，負載輻射凋亡腫瘤細胞的DC疫苗對膀胱腫瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效應(yīng)和生存期延長作用。我們建立的DC疫苗誘導(dǎo)的特異性CTL對MB49小鼠膀胱癌細胞建立荷瘤動物模型具有的很強的細胞毒活性。負載腫瘤抗原的DC疫苗可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生并維持長期的腫瘤記憶性細胞免疫反應(yīng)，對膀胱腫瘤細胞再次攻擊具有免疫保護作用，在膀胱腫瘤復(fù)發(fā)預(yù)防中具有良好應(yīng)用前景。充分說明以DC為中心的腫瘤