普萘洛爾治療血管瘤機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:
　　 1.觀察普萘洛爾對(duì)體外培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC-12細(xì)胞)細(xì)胞毒及增殖的影響。
　　 2.通過VEGF/ERK的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，探討普萘洛爾治療血管瘤的分子機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.采用不同濃度普萘洛爾干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞，光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)各組細(xì)胞細(xì)胞毒及增殖情況；蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot)法測(cè)定磷酸化ERK變化。
　

2、　 2.采用不同濃度VEGF刺激內(nèi)皮細(xì)胞，應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot)法測(cè)定磷酸化ERK變化，建立內(nèi)皮細(xì)胞VEGF陽(yáng)性系統(tǒng)。
　　 3.采用不同濃度普萘洛爾干預(yù)經(jīng)VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞，四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)各組細(xì)胞細(xì)胞毒及增殖情況；蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot)法測(cè)定磷酸化ERK變化。
　　 4.在抑制劑干預(yù)研究中，應(yīng)用ERK信號(hào)通路特異性抑制劑PD98059、普萘洛爾分別及聯(lián)合

3、處理經(jīng)及未經(jīng)VEGF刺激內(nèi)皮細(xì)胞，觀察內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞毒、增殖及磷酸化ERK的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.普萘洛爾濃度在1-16ug/ml的范圍內(nèi)，對(duì)正常人血管內(nèi)皮細(xì)胞安全、無細(xì)胞毒作用。
　　 2.VEGF在20ng/ml時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞磷酸化ERK表達(dá)最強(qiáng)，以此濃度建立內(nèi)皮細(xì)胞VEGF陽(yáng)性系統(tǒng)。
　　 3.與空白對(duì)照組相比，普萘洛爾對(duì)經(jīng)VEGF刺激內(nèi)皮細(xì)胞無細(xì)胞毒作用(P>0.05)；在普奈洛爾濃度為8-1