普萘洛爾對血管瘤干細胞增殖及分化的影響.pdf

1、背景:
　　嬰幼兒血管瘤(Infantilehemangioma，IH)是發(fā)生于嬰幼兒的最常見的良性腫瘤之一，具有先迅速增殖后自發(fā)性緩慢消退的獨特的生物學特性，最近研究表明血管瘤由干細胞(hemangiomastemcells，HemSCs)、內(nèi)皮細胞(hemangiomaendothelialcells,HemECs)和周細胞等組成，但是其發(fā)病機制及起源尚不十分明確，而干細胞來源學說在眾多學說中逐漸突顯。一種腎上腺素β受體(β-

2、AR)阻滯劑普萘洛爾由于一個偶然的發(fā)現(xiàn)被廣泛應用于IH的治療，由于其高效性和安全性而迅速成為治療IH的一線用藥，但其治療機制尚不明了，關于其對HemSCs的作用尚不明確。本研究旨在探討普萘洛爾對血管瘤干細胞的影響，及其治療血管瘤的作用機理。
　　目的:
　　1.檢測β-AR在HemSCs上的表達情況。
　　2.觀察普萘洛爾對HemSCs增殖及分化的影響。
　　3.從干細胞的角度初步解釋嬰幼兒血管瘤的發(fā)病機制及普萘

3、洛爾的治療機制。
　　方法:
　　1.獲取新鮮增殖期的血管瘤組織，免疫組化法檢測血管瘤特異性標記物葡萄糖轉運蛋白-1(GLUT-1)的表達。
　　2.組織塊培養(yǎng)的方法培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細胞，用免疫磁珠法分離提純CD133(+)HemSCs，并用流式細胞術鑒定純度。
　　3.用免疫細胞化學的方法分別檢測CD133(+)HemSCs、CD133(-)HemECs、HUVEC上β1-AR、β2-AR、CD31、CD34的表

4、達情況。
　　4.在體外，分別以1μM、10μM、50μM和100μM的普萘洛爾及異丙腎上腺素干擾HemECs、HemSCs，MTT法及細胞計數(shù)法分別于24h，48h和96h檢測各組細胞增殖活力和細胞數(shù)目。
　　5.在體外，以最佳濃度的普萘洛爾干擾CD133(+)HemSCs，流式細胞術檢測PRO干擾前后細胞中CD133陽性率。
　　結果:
　　1.GLUT-1在IH組織中廣泛表達，鑒定其為增殖期血管瘤組織。

5、r>　　2.從IH組織培養(yǎng)的原代細胞中成功分離了CD133(+)HemSCs，純度高達95％以上。CD133(+)HemSCs在原代HemECs中比例約占5％。
　　3.β1-AR、β2-AR、CD34在CD133(+)HemSCs中表達陽性。CD31在原代HemSCs、HemECs上弱陽性表達，隨傳代培養(yǎng)，約在九代左右呈強陽性。
　　4.普萘洛爾可有效抑制HemECs增殖，對HemSCs的增殖無明顯影響。
　　5.最