交泰丸在正常和PCPA失眠大鼠的藥動(dòng)學(xué)和PK-PD結(jié)合模型研究.pdf

1、目的:
　　交泰丸是治療心腎不交的經(jīng)典名方，原小檗堿型生物堿是交泰丸中具有代表性的活性成分，本文擬應(yīng)用PK-PD結(jié)合模型的研究思路，運(yùn)用腦微透析的研究方法，對(duì)交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿五種原小檗堿型生物堿的藥動(dòng)學(xué)和PK-PD結(jié)合模型研究，為進(jìn)一步探究交泰丸治療心腎不交失眠的作用機(jī)理和臨床的合理用藥提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根

2、堿在血漿的含量測(cè)定
　　采用BDS Hypersil C18液相色譜柱(50×2.1 mm i.d.，2.4μ m，Thermo Scientific)作為固定相，流動(dòng)相為乙腈-水（含5mmol醋酸銨并用甲酸將pH值調(diào)至5.0），流速為0.25 mL/min，柱溫為30℃，以四氫巴馬汀作為內(nèi)標(biāo)，用電噴霧離子化和正離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)，并考察方法的專屬性、線性范圍、精密度、準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性。
　　2.交泰丸單次和多次給藥后

3、在正常和PCPA失眠模型大鼠的藥動(dòng)學(xué)研究
　　模型組大鼠腹腔注射300 mg/kg對(duì)氯苯丙氨酸(PCPA);正常組注射同樣劑量的生理鹽水，大鼠失眠模型復(fù)制成功后，多次給藥組每天給予交泰丸灌胃液3 mL/kg，連續(xù)7天，單次給藥組一次給予交泰丸灌胃液3 mL/kg后開始大鼠眼眶靜脈叢取血。以LC-MS/MS法測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)血漿中小檗堿濃度，以Winnonlin5.0.1軟件求算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并采用SPSS17.0軟件對(duì)正常和失眠大鼠的主

4、要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。
　　3.交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿在腦微透析液中的含量測(cè)定
　　色譜柱為液相BDS Hypersil C18(50×2.1 mm i.d.，2.4μm, ThermoScientific)，采用梯度洗脫，0-3.7 min時(shí)，流動(dòng)相A:75％→25％;3.7-4.0min時(shí)，流動(dòng)相A為25％，流速為0.25 mL/min。流動(dòng)相A為pH5.0的甲酸水（含5mmol醋酸

5、銨并用甲酸將pH值調(diào)至5.0），流動(dòng)相B為乙腈。對(duì)五種原小檗堿型生物堿的腦微透析樣品進(jìn)行專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、穩(wěn)定性、交互效應(yīng)和柱后效應(yīng)方法學(xué)驗(yàn)證。
　　4.交泰丸主要活性成分在正常和失眠模型大鼠的PK-PD結(jié)合模型研究
　　大鼠腦立體定位儀定位，定位坐標(biāo)AP:-5.2mm; ML:+4.5mm; DV:-3.8mm，于大鼠大腦海馬內(nèi)埋入探針套管，用螺絲釘及牙科水泥固定，清理并縫合創(chuàng)口。待大鼠恢復(fù)3d后，模型組大鼠一

6、次性腹腔注射PCPA300 mg/kg;正常組注射同樣劑量的生理鹽水，30 h造成大鼠完全失眠后，在清醒狀態(tài)下插入微透析探針，以人工腦脊液2μL/min的速度灌流。以給藥后為0點(diǎn)，每30 min收集1管透析液，其中30μL測(cè)定神經(jīng)遞質(zhì)含量，另30μL測(cè)定交泰丸中生物堿，持續(xù)10 h，將樣品放入LC-MS/MS系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果:
　　1.交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿在血漿的含量測(cè)定

7、　　成功建立了同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿的分析方法。該方法簡(jiǎn)單、靈敏、快捷，需要的血漿量少，分析時(shí)間短，且方法學(xué)考察符合生物樣品檢測(cè)的要求，可為交泰丸的藥動(dòng)學(xué)研究提供可靠又便捷的檢測(cè)手段。
　　2.交泰丸單次和多次給藥后在正常和PCPA失眠模型大鼠的藥動(dòng)學(xué)研究
　　原小檗堿型生物堿在單次給藥后正常大鼠體內(nèi)的生物利用度較差，且達(dá)峰時(shí)間長(zhǎng)，多次給藥交泰丸后原小檗堿型生物堿的藥動(dòng)學(xué)

8、參數(shù)都與單次給藥組具有顯著性差異，這提示多次給藥有可能增加原小檗堿型生物堿在體內(nèi)的吸收，導(dǎo)致藥物在體內(nèi)的累積。原小檗堿型生物堿在失眠大鼠體內(nèi)的吸收比正常組好，生物利用度大大增加，這有利于其在疾病體內(nèi)迅速達(dá)到有效治療濃度，從而發(fā)揮其藥理作用。
　　3.交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿在腦微透析液中的含量測(cè)定
　　成功建立了同時(shí)測(cè)定大鼠腦微透析液中交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根

9、堿的分析方法，該方法在原有方法的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了色譜條件，達(dá)到了更低的定量下限，縮短了分析時(shí)間，并且簡(jiǎn)化了樣品處理過程，使得方法操作簡(jiǎn)便有效。專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、穩(wěn)定性、交互效應(yīng)和柱后效應(yīng)考察結(jié)果表明該方法符合生物樣品檢測(cè)要求。
　　4.交泰丸主要活性成分在正常和失眠模型大鼠的PK-PD結(jié)合模型研究
　　正常組與模型組的腦內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為具有顯著性差異，模型組五個(gè)原小檗堿型生物堿的生物利用度高于正常組，此外，對(duì)比血漿藥動(dòng)

10、學(xué)的研究結(jié)果，五個(gè)原小檗堿型生物堿的腦部藥動(dòng)學(xué)與血漿藥動(dòng)學(xué)行為顯著不同(主要表現(xiàn)為Cmax、Tmax和AUC)。說明五個(gè)原小檗堿型生物堿能透過血腦屏障，直接作用于海馬體。模型組中的原小檗堿型生物堿多巴胺的Fmax均較正常組明顯提高，而模型組中原小檗堿型生物堿的ECe50較正常組為小，提示交泰丸中主要活性成分在模型大鼠體內(nèi)DA藥效較正常大鼠增強(qiáng)。
　　結(jié)論:
　　交泰丸中原小檗堿型生物堿在正常和模型組大鼠的血漿、腦局部的藥動(dòng)學(xué)

11、行為都具有顯著性差異，無論是血漿還是腦局部藥動(dòng)學(xué)，模型組大鼠的生物利用度大于正常組，且血漿藥動(dòng)學(xué)中，多次給藥比單次給藥的生物利用度更高。交泰丸主要活性成分的腦部藥動(dòng)學(xué)與血漿藥動(dòng)學(xué)行為顯著不同，表明五個(gè)原小檗堿型生物堿能透過血腦屏障，直接作用于海馬體。交泰丸中主要活性成分在模型大鼠體內(nèi)多巴胺藥效較正常大鼠增強(qiáng)，且其在失眠大鼠體內(nèi)更快達(dá)到效應(yīng)部位。交泰丸治療心腎不交失眠的作用機(jī)制可能是通過對(duì)多巴胺的影響，從而使其發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠的作用。而對(duì)于其