HPVL1C-末端共同序列多肽抗血清評價HPV感染檢測能力的研究.pdf

1、目的:本課題組前期研究表明由本課題組發(fā)現(xiàn)并已申請專利的人乳頭瘤病毒(HPV)主要衣殼蛋白(L1)C-末端共同保守序列多肽,誘導(dǎo)動物產(chǎn)生的抗血清,對宮頸癌組織中多種 HPV型別具有檢測能力。本人課題的研究目的是確定 HPV多肽抗血清是否具有針對更多型別 HPV L1的廣譜反應(yīng)能力,和對臨床標(biāo)本內(nèi)的HPV是否具有良好的廣譜檢測能力。
　　方法:1)收集大量臨床宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本,以確定臨床上宮頸病變的檢出率;2)對一份標(biāo)本采用Nest-P

2、CR實驗檢測病毒基因的存在與否,確定 HPV陽性檢出率;3)對相同的另一份標(biāo)本以本課題組的HPV L1多肽抗血清為探針進行 ELISA實驗,確定標(biāo)本中病毒 L1蛋白的存在與否,從而確定 HPV陽性檢出率;4)對以上檢查方法均是陽性的標(biāo)本以 HPVL1多肽抗血清為一抗進行免疫細(xì)胞化學(xué)實驗(ICC);5)采用統(tǒng)計學(xué)軟件,比較分析以上檢查方法。
　　結(jié)果:1)共收集到宮頸 TCT標(biāo)本269例,細(xì)胞學(xué)診斷宮頸病變者12例,檢出率為4.46

3、％。2)Nest-PCR中,對所有標(biāo)本應(yīng)用HPVL1通用型引物 MY09/11擴增,得到 HPV DNA陽性標(biāo)本30例,HPV陽性檢出率為11.15％;對 MY09/11擴增后結(jié)果為 HPV DNA陰性的所有標(biāo)本再應(yīng)用HPVL1通用型引物 GP5+/6+擴增,檢出 HPV DNA陽性標(biāo)本51例,HPV陽性檢出率為21.34％;Nest-PCR共檢測到81例 HPV DNA陽性標(biāo)本,HPV DNA總檢出率為30.11％。3)263例宮頸

4、TCT標(biāo)本進行 BA-ELISA檢測,共檢出陽性標(biāo)本117例,HPV陽性檢出率為44.49％,免疫學(xué)檢測方法得到的HPV陽性檢出率明顯高于 HPV基因檢測(P<0.005)。4)免疫細(xì)胞化學(xué)實驗證實 L1多肽抗體能特異性識別含有 HPV病毒顆粒的宮頸細(xì)胞。
　　結(jié)論:1)宜昌地區(qū)宮頸細(xì)胞學(xué) TCT檢查得到的宮頸病變檢出率為4.46％,略高于全國水平。2)HPV L1基因保守序列的通用型引物 MY09/11和GP5+/6+通過套嵌方

5、式,既增強了標(biāo)本中微量病毒的載量,又增加了檢測型別,提高了陽性檢出率。但因引物擴增型別有限,不能完全涵蓋病毒所有型別。3)HPV免疫學(xué)(BA-ELISA)檢測不受病毒型別限制,可以更廣泛檢測到幾乎所有病毒的型別。4) HPVL1多肽抗體能特異性識別含有 HPV病毒顆粒的細(xì)胞。5)本課題組制備的HPV L1多肽抗體對 HPV L1具有廣譜反應(yīng)能力和明顯的多價性,對已知和未知型別的HPV都具有良好的檢測能力。本課題的研究為找到更全面更準(zhǔn)確更