鹽酸克倫特羅抗血清的制備及ELISA檢測方法的初步建立.pdf

1、為了彌補當前市場上鹽酸克倫特羅（CLB）快檢方法所存在的缺陷，尤其是以單克隆抗體為基礎操作周期長、專業(yè)技術要求高等不足之處，本實驗利用人工合成抗原BSA-CLB免疫日本大耳白家兔獲得了含鹽酸克倫特羅抗體的抗血清，并對其進行效價鑒定，在此基礎上初步建立了鹽酸克倫特羅的酶聯(lián)免疫吸附檢測方法，從而為進一步應用于市場檢測奠定了基礎。 首先，本研究采用正交試驗方法，利用重氮化反應原理將CLB和卵清白蛋白OVA、牛血清白蛋白BSA偶聯(lián)工藝

2、進行優(yōu)化，分析了各因素對偶聯(lián)反應的影響機理，并在得出的最佳條件下合成了高偶聯(lián)率的免疫抗原BSA-CLB和包被抗原OVA-CLB，通過紫外可見全波長掃描分析顯示偶聯(lián)前后載體蛋白的吸收峰發(fā)生了很大改變。以經(jīng)過改進的偶聯(lián)率計算方法計算得出OVA-CLB和BSA-CLB的偶聯(lián)率分別為29：1和52.3：1。 以免疫抗原BSA-CLB免疫日本大耳白家兔。免疫期間，以OVA-CLB包被酶標板，采用間接非競爭酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測血清效價，并

3、根據(jù)檢測結(jié)果決定放血時間。免疫四個月后，獲得的血清效價最高達到1：640000。 最后，本實驗利用免疫所得的抗血清，采用間接非競爭ELISA方法比較不同OVA-CLB包被量、不同抗血清及二抗稀釋度等對檢測結(jié)果的影響，確立了最佳檢測條件。并在此條件下根據(jù)檢測標準曲線及靈敏度情況對檢測體系的pH值、離子強度、反應時間等進行優(yōu)化，最終初步建立了以包被OVA-CLB為基礎的間接競爭性ELISA檢測CLB的方法，檢測靈敏度高達0.013