Erlotinib聯(lián)合電離輻射對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)好發(fā)于中國(guó)及東南亞國(guó)家，其中80％以上發(fā)生在中國(guó)，尤其以我國(guó)的華南地區(qū)最為常見。其發(fā)病因素尚未明確，可能與EB病毒感染、遺傳及環(huán)境因素關(guān)系密切。放射治療是治療鼻咽癌的首選治療方式，隨著放療聯(lián)合化療的應(yīng)用及放射治療技術(shù)的發(fā)展，一定程度地提高了鼻咽癌的治療療效和局部控制率。然而，即使經(jīng)過足量的根治性綜合治療，鼻咽癌患者的5年生存率只有59-75%。

2、盡管如此，鼻咽局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移仍是鼻咽癌患者的主要死因。因此，為了進(jìn)一步改善鼻咽癌患者的生存率，在采用現(xiàn)代放療技術(shù)、加強(qiáng)鼻咽癌放化療綜合治療局部區(qū)域晚期鼻咽癌的同時(shí)，有必要探討增強(qiáng)鼻咽癌放射敏感性方法。
　　腫瘤的分子靶向治療是近年來研究的熱點(diǎn)，特別是以針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR）為靶點(diǎn)的藥物。EGFR是原癌基因c-erbB1的表達(dá)產(chǎn)物，亦是Her(ErbB)

3、家族成員之一。EGFR是一種分子量為170ku跨膜酪氨酸激酶生長(zhǎng)因子受體，它分為胞外氨基端、跨膜部分和胞內(nèi)羧基端。胞外部分靠與配體結(jié)合來激活，已知的配體有EGF(Epidermal Growth Factor)、TGF-α（Transforming Growth Factorα）、雙調(diào)蛋白（amphiregulin）、肝素結(jié)合的EGF（heprin binding EGF-like growth factor）、BTC（betacell

4、ulin）和人表皮調(diào)解素（Epiregulin）。EGFR與配體結(jié)合，形成二聚體，激活位于細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸激酶，使酪氨酸殘基發(fā)生分子間的自磷酸化，啟動(dòng)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使信號(hào)從細(xì)胞漿傳入細(xì)胞核內(nèi)，促進(jìn)有絲分裂反應(yīng)。在多種腫瘤中存在 EGFR高表達(dá)，如頭頸部腫瘤、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌及結(jié)直腸癌等實(shí)體瘤，其中頭頸部鱗狀細(xì)胞癌EGFR表達(dá)率高達(dá)90%-100%。研究表明，EGFR過表達(dá)或高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、粘附、轉(zhuǎn)移及患者的生

5、存率低和轉(zhuǎn)移性風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。
　　以 EGFR為靶點(diǎn)的藥物可分為兩類：一類是單克隆抗體，如西妥昔單抗（Cetuximab，C225）、尼妥珠單抗（Nimotuzumab）、帕尼珠單抗（Panitumumab）等，此類單克隆抗體是通過競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合EGFR胞外區(qū)域，阻斷細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，從而達(dá)到抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的作用；另一類是小分子酪氨酸激酶抑制劑，如吉非替尼（Gefitinib，Iressa）、厄洛替尼（Erlotinib,Tarceva）等

6、，此類小分子化合物通過與EGFR胞內(nèi)區(qū)酪氨酸結(jié)構(gòu)域競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，抑制磷酸化，從而阻斷信號(hào)傳導(dǎo)通路。
　　目前已有較多有關(guān) EGFR抑制劑用于治療鼻咽癌的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)及臨床研究。國(guó)內(nèi)外基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)顯示，EGFR小分子酪氨酸激酶抑制劑Iressa可以抑制鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的生長(zhǎng)，聯(lián)合電離輻射可誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的凋亡、引起S細(xì)胞比例下降及細(xì)胞周期G2/M期阻滯、抑制腫瘤細(xì)胞DNA分子的損傷修復(fù)，從而提高放射敏感性。裸鼠實(shí)驗(yàn)證實(shí)，Ires

7、sa聯(lián)合放射治療可降低頭頸部腫瘤腫瘤的生長(zhǎng)速度。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，鼻咽癌組織中EGFR表達(dá)率為70.9%-100%，然而另一種小分子酪氨酸激酶抑制劑 Erlotinib對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，對(duì)鼻咽癌是否存在放療增敏作用，目前尚無相關(guān)研究。
　　本研究將探討Erlotinib對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株增殖抑制作用及體外觀察Erlotinib聯(lián)合放療對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株的放射敏感性、凋亡及細(xì)胞周期的影響。
　　方法：
　　采用MTS法檢測(cè)不同劑

8、量梯度 Erlotinib作用72h時(shí)間點(diǎn)對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE2細(xì)胞的增殖抑制作用，根據(jù)平均OD值計(jì)算腫瘤細(xì)胞增殖抑制率；以平板克隆形成技術(shù)檢測(cè) Erlotinib對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株放射敏感性的影響，計(jì)算不同輻射劑量下的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)，按單擊多靶模型繪制細(xì)胞存活曲線；采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)Erlotinib聯(lián)合放射治療對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE2細(xì)胞凋亡及周期的影響情況。
　　結(jié)果：
　　MTS結(jié)果顯示，Erloti

9、nib對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE2有一定生長(zhǎng)抑制作用，但抑制作用不明顯，最大抑制率僅為9.74％；而Erlotinib對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE1無增殖抑制作用。
　　Erlotinib增強(qiáng)了鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE2的放射敏感性，放射增敏比分別為1.076、1.109。
　　Erlotinib單藥對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE2無誘導(dǎo)凋亡作用。Erlotinib聯(lián)合電離輻射可促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞株 CNE2放射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，但對(duì)CNE