PCDH8基因?qū)Ρ茄拾┘毎闏NE-1作用機制的研究.pdf

1、目的：探討PCDH8基因表達對鼻咽癌細胞體外增殖、周期、侵襲、藥物敏感性等生物學行為的影響及其機制研究。
　　 方法：采用脂質(zhì)體介導將質(zhì)粒pcDNA3.1-PCDH8（實驗組）與質(zhì)粒pcDNA3.1（對照組）轉(zhuǎn)染至鼻咽癌細胞株CNE-1，應用RT-PCR、Westernblot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后CNE-1細胞中PCDH8 mRNA及蛋白的表達情況;通過CCK-8細胞生長曲線試驗，流式細胞周期試驗，Transwell侵襲試驗、CCK-

2、8細胞藥物敏感性試驗及裸鼠皮下種植瘤模型，進一步對轉(zhuǎn)染PCDH8基因的細胞株CNE-1的增殖能力、生長周期、細胞侵襲能力、對化療藥物的敏感性及其體內(nèi)成瘤能力進行分析，并與轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒的細胞株進行對比。通過Real time PCR檢測實驗組與對照組MMP-9、MMP-2、VEGF基因mRNA水平表達變化，Western blot檢測實驗組與對照組CDK-4、P21、P27、JNK基因蛋白水平表達變化，了解PCDH8基因在鼻咽癌細胞內(nèi)的作

3、用機制。
　　 結(jié)果：①RT-PCR、Western blot檢測表明轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-PCDH8的實驗組細胞株中PCDH8 mRNA及蛋白成功表達并明顯高于轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1的對照組細胞株(P＜0.05)。②CCK-8細胞生長曲線試驗表明試驗組細胞株的生長速度明顯低于對照組(P＜0.05)。③流式細胞周期試驗檢測實驗組細胞株G0/G1期較對照組增加，S期細胞較對照組減少(P＜0.05);④Tramswell侵襲試

4、驗表明實驗組細胞株侵襲能力明顯低于對照組(P＜0.05)。⑤CCK-8細胞藥物敏感性試驗表明PCDH8基因表達能顯著提高鼻咽癌細胞株CNE-1對順鉑化療藥物的敏感性(P＜0.05);⑥裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤模型中表達PCDH8基因的實驗組CNE-1細胞的成瘤能力低于對照組CNE-1細胞(P＜0.05)。⑦Realtime PCR試驗證明在mRNA水平上MMP-9在實驗組的表達量低于對照組(P＜0.05)，而MMP-2、VEGF在實驗組的表

5、達量與對照組無明顯差別(P＞0.05);⑧Western bolt試驗中CDK-4、P27、JNK基因在實驗組中的表達高于實驗組的表達(P＜0.05)。P21在實驗組中的表達高于對照區(qū)但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：脂質(zhì)體成功介導pcDNA3.1-PCDH8與pcDNA3.1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入鼻咽癌CNE-1細胞株并建立穩(wěn)定細胞株。PCDH8基因的表達能降低CNE-1細胞的增殖、侵襲能力，延緩細胞分裂周期，提高對順鉑化