超聲對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株拓?fù)涮婵禑峄熥饔糜绊懙捏w外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：以人鼻咽癌低分化細(xì)胞株(CNE-2)為對(duì)象，觀察超聲對(duì)拓?fù)涮婵?TopotecanTPT)熱化療作用的影響． 方法： 1．以體外培養(yǎng)鼻咽癌細(xì)胞株為靶細(xì)胞，接種于96孔培養(yǎng)板，以未加藥的細(xì)胞作為陰性對(duì)照，以不含細(xì)胞的RPMI-1640培養(yǎng)液為空白對(duì)照，培養(yǎng)2小時(shí)貼壁。再加入不同濃度Topotecan，分別為0.1μg/ml、0.2g/ml、0.3g/ml、0.4μg/ml、0.5μg/ml，藥物作用1小時(shí)后，用Han

2、k’s液洗滌2次后加入等量RPMI-1640培養(yǎng)液再培養(yǎng)48小時(shí)。用WST-1法酶標(biāo)儀測(cè)得波長在450nm的各濃度的吸光度值(OD值)，計(jì)算出Topotecan對(duì)細(xì)胞株的抑制率，再通過相應(yīng)濃度的抑制率，使用直線回歸方程計(jì)算得到Topotecan的半數(shù)抑制濃度(IC50)。重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)，取三次實(shí)驗(yàn)的平均值。 2．再使用所測(cè)得的IC50值的20％為藥物濃度，采用恒溫水浴加溫法進(jìn)行熱化療研究。實(shí)驗(yàn)分為Topotecan組、超聲作用組、

3、單純熱療組、熱療+Topotecan組、超聲+Topotecan組、超聲+熱療+Topotecan組、空白對(duì)照組，超聲使用1MHz和3MHz兩種頻率，處理完成后(藥物作用90分鐘)用Hank’s液洗滌2次再用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌1次，加入等量RPMI-1640培養(yǎng)液配成細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)48小時(shí)，用WST-1法在酶標(biāo)儀上測(cè)得波長450 nm處的吸光度值，再計(jì)算得到不同組的生長抑制率(Growth inhibition

4、 ratio GIR)。重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)，取平均值。使用SPSS軟件方差分析對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；3．選取對(duì)照組、單純超聲組、Topotecan組、熱療+Topotecan組、超聲+Topotecan組、超聲+熱療+Topotecan組細(xì)胞離心后用戊二醛固定送電鏡觀察細(xì)胞亞細(xì)結(jié)構(gòu)變化。 結(jié)果： 1．三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，得到Topotecan對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度(IC50)為0.396μg/ml； 2．Topote

5、can組、熱療+Topotecan組、單純熱療組、超聲+熱療+Topotecan組(3MHz)、超聲治療組(3MHz)、超聲治療組(1MHz)、超聲+Topotecan組(1MHz)、超聲+Topotecan組(3MHz)、超聲+熱療+Topotecan組(1MHz)的生長抑制率分別為：24.78％、40.69％、30.23％、47.52％、10.65％、15.11％、38.37％、31.48％、 60.32％，各組間進(jìn)行完全隨機(jī)的方差

6、分析，進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)P>0.05，說明方差齊性，組間比較采用LSD法。依據(jù)生長抑制率結(jié)果可以看出超聲聯(lián)合Topotecan組效果強(qiáng)于Topotecan組，P<0.01差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；超聲聯(lián)合熱化療組效果均強(qiáng)于熱化療組，P<0.01．差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩種頻率超聲之間比較，不論是與藥物還是與熱化療聯(lián)合，1MHz的效應(yīng)要優(yōu)于3MHz，組間比較P<0.01差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 3．電鏡結(jié)果顯示：對(duì)照組細(xì)胞主要表現(xiàn)為

7、核大，核仁清楚，胞質(zhì)中線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)清楚，少量細(xì)胞可見雙核；單純超聲組細(xì)胞表現(xiàn)為核/質(zhì)比較正常有所減小，核膜、核仁清楚，胞質(zhì)中線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)欠清晰，電子密度較對(duì)照組顯低；單純藥物組細(xì)胞核/質(zhì)比明顯減小，核中異染色質(zhì)出現(xiàn)，線粒體有減少趨勢(shì)；單純熱療組細(xì)胞核/質(zhì)比減小，染色質(zhì)出現(xiàn)固縮，細(xì)胞核中有異染色質(zhì)出現(xiàn)，少量細(xì)胞出現(xiàn)水腫；熱療+TPT組細(xì)胞主要表現(xiàn)為核中異染色質(zhì)明顯增多，線粒體有減少趨勢(shì)，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，少量細(xì)胞水腫；超聲(1M

8、Hz)+TPT組細(xì)胞主要以水腫破壞為主，胞質(zhì)中髓樣改變明顯，部分細(xì)胞染色質(zhì)固縮邊集；超聲(3MHz)+TPT表現(xiàn)為少量細(xì)胞水腫，．胞核中染色質(zhì)固縮，有異染色質(zhì)和髓樣結(jié)構(gòu)出現(xiàn)；超聲+熱化療組細(xì)胞損傷嚴(yán)重，出現(xiàn)大量的凋亡壞死細(xì)胞，細(xì)胞核裂解，髓樣改變多見； 結(jié)論： 1．超聲對(duì)Topotecan有增效作用； 2．超聲對(duì)Topotecan的熱化療效應(yīng)有明顯的增強(qiáng)作用； 3．超聲對(duì)Topotecan以及Topote