熱療聯(lián)合化療對肺癌細胞株作用的實驗研究.pdf

1、研究背景肺癌是嚴重危害人類健康的常見惡性腫瘤，其發(fā)病率及死亡率均居惡性腫瘤前列[1,2]，導致肺癌高死亡率的重要原因是單純化療或放療不能很好的控制癌癥的發(fā)展。近年來,熱療作為繼手術(shù)、放療、化療、生物治療之后的第五種治療方法引起了人們廣泛的關(guān)注[3]，腫瘤熱療有了很大發(fā)展。臨床上常使用熱療配合放化療[4]治療肺癌，但理論研究的滯后嚴重影響了熱療臨床實踐的深入。目前，國內(nèi)外對不同病理類型的腫瘤細胞對熱療的敏感性差異的研究未見報道，熱療合用不

2、同化療藥物對腫瘤細胞的影響及其可能的分子生物學機制值得深入研究。長春瑞濱（NVB）、順鉑(DDP)、吉西他濱(GEM)、多西他賽(TAX)、依托泊苷(VP-16)均為臨床應用廣泛的化療藥物，對肺癌有較好的治療效果，他們與熱療聯(lián)合作用的效果值得進一步探討。
　　目的：以人肺腺癌A549細胞株和人小細胞肺癌SBC-5細胞株為研究對象，觀察不同溫度條件下熱療及其與化療藥長春瑞濱（NVB）、順鉑(DDP)、多西他賽(TAX)、吉西他濱(G

3、EM)、依托泊苷(VP-16)聯(lián)合對兩細胞株的作用效果，探討不同病理類型的肺癌細胞株對熱療的敏感性差異及可能的分子生物學機制，并對熱療與五種化療藥的聯(lián)合作用效果進行初步評價，為肺癌的臨床熱療和熱化療提供實驗依據(jù)。
　　方法：1、應用四甲基偶氮唑藍（MTT）快速比色法測定細胞增殖，確定長春瑞濱（NVB）、順鉑(DDP)、多西他賽(TAX)、吉西他濱(GEM)、依托泊苷(VP-16)的工作濃度，并以該濃度進行化療或與熱療聯(lián)合，計算24

4、h細胞生存率，根據(jù)Veleriote法[5]判斷熱化療聯(lián)合24h的作用效果；
　　2、24h流式細胞儀檢測長春瑞濱與42℃單獨或聯(lián)合對A549細胞株的凋亡和周期的影響情況；
　　3、24h流式細胞儀檢測依托泊苷與42℃單獨或聯(lián)合對SBC-5細胞株的凋亡和周期的影響情況；
　　4、透射電鏡觀察依托泊苷與42℃單獨或聯(lián)合對SBC-5細胞株超微結(jié)構(gòu)的變化情況。
　　結(jié)果：1、單獨熱療、單獨化療或熱化療聯(lián)合均對肺癌細胞株

5、的生長有抑制作用，且抑制率隨著熱療溫度的升高、化療藥物濃度的增加而增強（P＜0.05)，熱化療組抑制率尤為明顯（P＜0.01)；以24h時IC10～IC20的藥物濃度作為試驗的工作濃度，確定藥物對兩株細胞的工作濃度為：NVB1ug/ml，DDP0.1ug/ml，TAX1ug/ml，GEM0.1ug/ml，VP-160.1ug/ml；根據(jù)Veleriote法[5]判斷熱化療聯(lián)合24h的作用效果：NVB、DDP、TAX、GEM、VP-16與

6、熱療聯(lián)合均表現(xiàn)出協(xié)同或次加作用；
　　2、A549細胞周期分析發(fā)現(xiàn)42℃熱療（42℃，1h）降低了S期細胞所占比例；單獨化療組（NVB,1ug/ml）使細胞周期阻滯于G2/M期；與單獨化療組（NVB,1ug/ml）相比熱化療組（42℃+NVB,1ug/ml,1h）的S期細胞所占比例減少，G2/M期細胞增多；對照組、熱療組、化療組、熱化療組細胞凋亡率分別為1.5％、7.9％、13.9％、29.1％；
　　3、SBC-5細胞周期

7、分析發(fā)現(xiàn)42℃熱療（42℃，1h）降低了S期細胞所占比例；單獨化療組（VP-16,0.1ug/ml）使細胞周期阻滯于G2/M期；與單獨化療組（VP-16,0.1ug/ml）相比熱化療組（42℃+VP-16,0.1ug/ml,1h）的G2/M期細胞所占比例減少，S期細胞增多；對照組、熱療組、化療組、熱化療組細胞凋亡率分別為3.3％、6.9％、10.3％、21.1％；
　　4、透射電鏡下見（SBC-5）：對照組細胞核大，核仁清楚，染色

8、質(zhì)均勻，細胞器結(jié)構(gòu)正常，胞膜完整；熱療組（42℃，1h）染色質(zhì)凝集，核膜完整，細胞器結(jié)構(gòu)腫脹；化療組（VP-16,0.1ug/ml）細胞皺縮，胞質(zhì)濃縮，染色質(zhì)聚集于核膜；熱化療組（42℃+VP-16,0.1ug/ml,1h）細胞碎裂成凋亡小體，胞膜完整，染色質(zhì)不均勻分布于各個小體內(nèi)。
　　結(jié)論：1、單獨熱療與單獨化療均對兩株細胞有抑制作用（P＜0.05)；
　　2、SBC-5細胞株對熱療、熱化療較A549細胞株敏感；