CREB3對結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的影響及其機制.pdf

1、背景:結(jié)直腸癌(Colorectal cancer，CRC)患者的死亡率很高，而轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌患者死亡的主要原因。目前沒有任何測試或生物標(biāo)志物能精確地預(yù)測腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此，提高預(yù)測侵襲轉(zhuǎn)移的手段是十分有必要的，鑒定生物標(biāo)志物，監(jiān)測結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移將使醫(yī)療個性化，提高癌癥患者的存活率。CREB3(也稱Luman或LZIP)是CREB3亞家族轉(zhuǎn)錄因子的原型，是一種bZIP轉(zhuǎn)錄因子，它不僅參與了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)，而且還在許多生物

2、學(xué)過程，包括細(xì)胞遷移以及癌變中起到至關(guān)重要的作用。CREB3能與轉(zhuǎn)錄共激活子HCF1，丙型肝炎病毒核心蛋白，CC趨化因子受體，和樹突狀細(xì)胞特異性跨膜蛋白相互作用。還有研究指出CREB3可能與乳腺癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本實驗旨在研究與結(jié)直腸癌浸潤轉(zhuǎn)移相關(guān)的生物標(biāo)志物，提高預(yù)測結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的手段。
　　方法:(1)用表達(dá)譜芯片檢測結(jié)直腸癌FFPE組織中mRNA表達(dá)譜的差異。(2)采用原位雜交技術(shù)和免疫組織化學(xué)技術(shù)對芯片

3、結(jié)果進(jìn)行驗證。(3)QPCR檢測三株結(jié)直腸癌細(xì)胞（分別為HCT116、SW620和SW480）中CREB3的表達(dá)。(4) Transwell法檢測三株結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移能力。(5)免疫細(xì)胞化學(xué)對SW480細(xì)胞中的CREB3進(jìn)行定位。(6) QPCR法檢測三株結(jié)直腸癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)如:TWIST1、β-catenin、MMP9和MMP2。(7)siRNA法瞬時干擾SW480細(xì)胞中的CREB3后，QPCR檢測轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(TWIS

4、T1、β-catenin、MMP9、MMP2)的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)芯片結(jié)果顯示，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌患者的轉(zhuǎn)移癌灶中，CREB3的表達(dá)明顯高于其原發(fā)癌灶;在復(fù)發(fā)患者的復(fù)發(fā)癌灶中，CREB3的表達(dá)明顯高于其原發(fā)癌灶。(2)原位雜交技術(shù)和免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)移組患者原發(fā)灶和癌旁組織中的CREB3表達(dá)明顯高于無轉(zhuǎn)移組患者的原發(fā)灶和癌旁組織。(3) QPCR結(jié)果顯示三株結(jié)直腸癌細(xì)胞中SW480細(xì)胞中CREB3的表達(dá)最高。(4)三株結(jié)

5、直腸癌細(xì)胞中SW480細(xì)胞的遷移能力最強。(5)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示在SW480細(xì)胞中CREB3主要表達(dá)在胞漿，少量表達(dá)在胞核。(6) QPCR顯示三株結(jié)直腸癌細(xì)胞中與轉(zhuǎn)移相關(guān)的幾個基因如β-catenin、MMP9和MMP2在SW480細(xì)胞中的表達(dá)最高，趨勢與CREB3相同。(7)瞬時干擾SW480細(xì)胞中的CREB3后，QPCR結(jié)果顯示MMP2的表達(dá)顯著下降，Twist1、β-catenin和MMP9的表達(dá)無明顯變化。
　　結(jié)論