miR-30a對結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響及其相關(guān)分子機制的初步研究.pdf

1、目的：
　　研究miR-30a對結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲遷移的影響并初步探討其可能的分子機制。
　　方法：
　　1.miR-30a的相對表達量
　　采用莖環(huán)實時熒光定量 PCR技術(shù)檢測不同轉(zhuǎn)移能力的結(jié)直腸癌細(xì)胞株中miR-30a的相對表達量，初步分析其與結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移是否相關(guān)。
　　2.miR-30a對結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲遷移的影響
　　1）構(gòu)建pre-miR-30a過表達的慢病毒顆粒，并感染miR-30a表達量

2、較低的SW620。熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染情況，實時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染效率。
　　2）利用劃痕實驗檢測過表達miR-30a后SW620的遷移特性，Transwell小室侵襲實驗檢測其侵襲性。
　　3.miR-30a抑制結(jié)直腸癌侵襲遷移的分子機制
　　1）miR-30a作用靶點的預(yù)測以has-miR-30a為檢索詞，利用數(shù)據(jù)庫Targetscan、miRanda(microRNA.org)、miRDB對miR-30a進行靶

3、基因的預(yù)測，挑選軟件交集較多以及預(yù)測值較高的作為靶點，即AEG-1/MTDH作為研究對象。
　　2）Western blot檢測過表達miR-30a后AEG-1/MTDH蛋白表達水平，實時熒光定量PCR技術(shù)檢測相應(yīng)AEG-1/MTDHmRNA的相對表達量。
　　4.統(tǒng)計學(xué)分析
　　采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，實驗數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用兩組獨立樣本t檢驗進行兩組間差異的比較，采用單因素方差分

4、析進行多組計量間資料比較，采用LSD-t檢驗進行兩組間資料的比較，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1．相對于SW480（1.00±0.00）而言,miR-30a在Caco2中的相對表達量為0.88±0.084，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.547,p=0.126）；在轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系（HT-29、HCT116和SW620）中的相對表達量均顯著降低，分別是0.74±0.081；0.37±0.055；0.29±0.040，差異

5、均具有統(tǒng)計學(xué)意義（t HT-29=5.600，P=0.030；t HCT-116=19.92， p=0.002；t SW620=30.74，p=0.001）其中在高度惡性的SW620細(xì)胞系中表達最低。
　　2．生物學(xué)軟件分析miR-30a可能的靶點是AEG-1/MTDH；在SW620中轉(zhuǎn)染pre-miR-30a后AEG-1/MTDHmRNA和蛋白的表達量明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1．miR-30a