微囊化骺板軟骨細(xì)胞移植修復(fù)幼兔骺板損傷的實驗研究.pdf

1、因外傷、感染、腫瘤等原因造成的骺板損傷是兒童特有的常見疾病，損傷后出現(xiàn)骺板部分早閉，嚴(yán)重者將導(dǎo)致患兒肢體短縮及成角畸形。目前，臨床上主要采用切除骨橋，填充脂肪、骨水泥或骨蠟等方法治療骺板早閉。隨著組織工程學(xué)的發(fā)展，組織工程化骺板細(xì)胞廣泛應(yīng)用于骺板損傷模型，并取得了一定實驗效果。然而，同種異體骺板細(xì)胞的抗原性限制其臨床應(yīng)用。本研究應(yīng)用APA微囊包裹同種異體骺板細(xì)胞以減少機(jī)體免疫排斥反應(yīng)，同時通過釋放TGF-D 1誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨

2、細(xì)胞方向分化，以達(dá)到修復(fù)骺板損傷的目的。
　　 目的：建立骺板細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)及凍存的實驗方法；制備APA微囊化骺板細(xì)胞，并觀察其對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用；將APA微囊化骺板細(xì)胞植入骺板缺損區(qū)，觀察其能否阻止骨橋形成、延長骺板開放時間及恢復(fù)肢體的縱向生長能力。
　　 方法：（1）體外分離、培養(yǎng)幼兔股骨遠(yuǎn)端及脛骨近端的骺板細(xì)胞；并進(jìn)行甲苯胺藍(lán)、番紅“0”及Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色，鑒別骺板細(xì)胞在體外培養(yǎng)時的生物

3、學(xué)表型；通過ELISA方法檢測骺板細(xì)胞對TGF-β1等細(xì)胞因子的分泌情況。（2）制備APA微囊化骺板細(xì)胞，并檢測微囊內(nèi)骺板細(xì)胞對TGF-β1的釋放情況；將微囊化骺板細(xì)胞與BMSCs共培養(yǎng)，觀察誘導(dǎo)后的BMSCs是否具備軟骨細(xì)胞的生物學(xué)表型。（3）構(gòu)建幼兔股骨遠(yuǎn)端骺板損傷模型，隨機(jī)分為4組，分別將APA微囊化骺板細(xì)胞、APA空白微囊及骺板細(xì)胞植入缺損模型，并設(shè)置空白組作為對照。術(shù)后進(jìn)行雙下肢X線片檢查對比觀察雙側(cè)股骨短縮及成角畸形情況，在

4、4、8、12、16周各組分別取材、染色，觀察骺板缺損部分的修復(fù)情況。
　　 結(jié)果：（1）通過體外分離方法獲得大量具備良好生物學(xué)活性的骺板細(xì)胞，CCK-8生長曲線顯示骺板細(xì)胞在體外培養(yǎng)時增殖情況良好；組織化學(xué)染色證實其具有正常的骺板細(xì)胞表型。
　　 （2）骺板細(xì)胞在微囊凝膠中培養(yǎng)時，生長、增殖情況良好，并向細(xì)胞周圍分泌糖胺聚糖及Ⅱ型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，而且通過微囊膜釋放TGF-β1誘導(dǎo)BMSCs向軟骨細(xì)胞方向分化。
　

5、　 （3）微囊化骺板細(xì)胞植入組顯示在缺損部位可見柱狀結(jié)構(gòu)的骺板樣細(xì)胞以及類軟骨陷窩樣結(jié)構(gòu)，在缺損區(qū)周圍有大量微囊化細(xì)胞，呈圓球形，形態(tài)完整，微囊內(nèi)可見存活的骺板細(xì)胞。X線片顯示肢體出現(xiàn)輕度短縮及成角畸形，其程度均小于其余組別（P<0.05）?？瞻孜⒛医M顯示骺板缺損充滿微囊和骨小梁結(jié)構(gòu)。骺板細(xì)胞植入組可見少量散在的骺板細(xì)胞，周圍出現(xiàn)淋巴細(xì)胞炎癥反應(yīng)?？瞻捉M缺損區(qū)域可見結(jié)締組織和血管，缺損空腔塌陷形成骨橋。
　　 結(jié)論：本實驗結(jié)果