組織工程皮膚替代物的研制與應(yīng)用.pdf

1、目的：研制無(wú)細(xì)胞毒性豬去細(xì)胞真皮基質(zhì)(PADM)，進(jìn)行PADM修復(fù)深度燒傷創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)研究及臨床觀察；制備成纖維細(xì)胞-膠原-PADM復(fù)合基質(zhì)，構(gòu)建組織工程全層皮膚并進(jìn)行燒傷創(chuàng)面修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究。 方法：1.取0.3-0.4mm厚的豬斷層皮片，使用高滲鹽水/氫氧化鈉法制備PADM，經(jīng)交聯(lián)和消毒后進(jìn)行細(xì)菌學(xué)及豬病毒學(xué)檢測(cè)。PADM植入SD大鼠皮下，術(shù)后動(dòng)態(tài)觀察。SD大鼠背部做全層皮膚缺損，實(shí)驗(yàn)組Ⅰ(高滲鹽水/氫氧化鈉法制備的PADM+自

2、體微粒皮、同種異體皮移植)、實(shí)驗(yàn)組Ⅱ(DispaseⅡ/TritonX-100法制備的PADM+自體微粒皮、同種異體皮移植)，手術(shù)后2，4、6周動(dòng)態(tài)觀察植皮成活情況。在知情同意的前提下，大面積深度燒傷患者切削痂后創(chuàng)面，應(yīng)用PADM+自體微粒皮+異體皮覆蓋創(chuàng)面，手術(shù)后觀察創(chuàng)面愈合情況。2.酶消化法進(jìn)行表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，繪制表皮細(xì)胞原代生長(zhǎng)曲線，MTT法測(cè)定傳代后表皮細(xì)胞的增殖。成纖維細(xì)胞直接或與膠原混合后種植于PADM表面，構(gòu)建活

3、性真皮替代物。乩ISA法測(cè)定培養(yǎng)液中人TGF-β1、bFGF含量。表皮細(xì)胞種植在活性真皮基質(zhì)的膠原面，構(gòu)建組織工程皮膚。RT-PCR法檢測(cè)氣-液面培養(yǎng)對(duì)表皮細(xì)胞bFGF、TGF-β1、KGF表達(dá)影響。SD大鼠背部全層皮膚缺損，分別進(jìn)行組織工程皮膚(實(shí)驗(yàn)Ⅰ組)和單純表皮細(xì)胞膜片移植(實(shí)驗(yàn)Ⅱ組)的實(shí)驗(yàn)研究。 結(jié)果：1.PADM無(wú)細(xì)胞成分，細(xì)菌學(xué)和病毒檢測(cè)均為陰性。大鼠皮下植入PADM術(shù)后24周，仍然可見(jiàn)其結(jié)構(gòu)。2.實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ愈合質(zhì)

4、量無(wú)差異，上皮細(xì)胞分化良好，膠原纖維排列有序，基底膜完整。PADM結(jié)合自體微粒皮和異體皮移植，創(chuàng)面愈合質(zhì)量明顯優(yōu)于自體微粒皮和異體皮移植的臨床效果。3.成纖維細(xì)胞和表皮細(xì)胞體外培養(yǎng)均貼壁生長(zhǎng)。原代表皮細(xì)胞生長(zhǎng)速度為包皮組＞頭皮組＞腋窩組，經(jīng)過(guò)傳代后不同部位表皮細(xì)胞生長(zhǎng)增殖無(wú)差別(P＞0.05)。4.實(shí)驗(yàn)組Ⅰ的TGF-β和bFGF含量至第8天已經(jīng)達(dá)到穩(wěn)定水平，實(shí)驗(yàn)組Ⅱ第4天含量達(dá)到穩(wěn)定水平，實(shí)驗(yàn)組Ⅱ的細(xì)胞因子含量高于實(shí)驗(yàn)組Ⅰ(P＜0.05

5、)。5.組織工程皮膚具有上皮層和真皮層，表皮細(xì)胞之間有橋粒連接。氣-液界面培養(yǎng)獲得的膜片表皮細(xì)胞分化良好，bFGF、TGF-β1、KGF基因表達(dá)明顯升高。6.組織工程皮膚移植與單純表皮細(xì)胞膜片比較，移植物成活率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，而收縮率有明顯減低(P＜0.05)，基底膜結(jié)構(gòu)完整。 結(jié)論：高滲鹽水/氫氧化鈉法制作的PADM無(wú)細(xì)胞毒性，可以作為真皮支架在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間存在，改善深度創(chuàng)面的外觀及功能。成纖維細(xì)胞-膠原-PADM