骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程皮膚中的應(yīng)用.pdf

1、創(chuàng)傷后皮膚缺損是臨床最常見的病癥之一,僅靠創(chuàng)面自身難以實(shí)現(xiàn)皮膚的再生,需要足夠的皮膚替代物進(jìn)行修復(fù).開發(fā)具有生物活性的人工皮膚替代物,已成為治療創(chuàng)傷后皮膚缺損的重要策略.組織工程成功與否取決于以下三個(gè)關(guān)鍵性制約因素:種子細(xì)胞,支架材料以及有助于細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的外在環(huán)境.其中種子細(xì)胞一直是組織工程研究的核心問題,理想的種子細(xì)胞應(yīng)該具有容易獲得、容易在體外培養(yǎng)增殖、長(zhǎng)期傳代不改變生物學(xué)特性、抗原性小、組織修復(fù)能力強(qiáng)等特征.近年來干細(xì)胞的研究

2、發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)具備作為組織工程種子細(xì)胞的條件,并在組織工程骨的研制中被廣泛應(yīng)用.但目前關(guān)于MSCs在皮膚缺損愈合中的作用鮮見報(bào)道.MSCs能否作為種子細(xì)胞應(yīng)用于組織工程皮膚的構(gòu)建?以其構(gòu)建的組織工程皮膚能否促進(jìn)皮膚缺損愈合?基于這一思路,本研究利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、基因工程技術(shù)及組織工程技術(shù),從構(gòu)建組織工程皮膚的種子細(xì)胞入手,分離純化了MSCs,實(shí)現(xiàn)了其體外長(zhǎng)期傳代及大量擴(kuò)增,并對(duì)MSCs進(jìn)行了EGF基因修飾.在此基礎(chǔ)上,

3、構(gòu)建組織工程皮膚生物支架,進(jìn)而將MSCs種植于生物支架材料上,與角質(zhì)形成細(xì)胞復(fù)合構(gòu)建組織工程皮膚.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,用MSCs作為種子細(xì)胞所構(gòu)建組織工程皮膚對(duì)皮膚缺損具有顯著促愈作用,而MSCs經(jīng)EGF修飾后促愈作用更為明顯.本實(shí)驗(yàn)主要結(jié)果及結(jié)論如下:1. 在綜合帖壁法和密度梯度離心法分離MSCs的基礎(chǔ)上,利用雙層過濾法對(duì)MSCs進(jìn)行純化,優(yōu)化了MSCs分離純化方法.所得MSCs形態(tài)均一,細(xì)胞核原始,細(xì)胞器不發(fā)達(dá);傳至25代未見老化現(xiàn)象

4、;體外增殖迅速;具有MSCs表面標(biāo)志物;保持了向成骨及成脂分化的潛能,誘導(dǎo)分化后期成骨及成脂分化能力強(qiáng)于傳統(tǒng)密度梯度離心法所獲細(xì)胞.2. 制備的生物支架材料符合組織工程皮膚膠原多孔膜的最優(yōu)結(jié)構(gòu).3. 利用基因工程技術(shù)成功構(gòu)建pcDNA3.1/EGF真核表達(dá)載體,完成對(duì)MSCs的基因修飾;在體外培養(yǎng)條件下實(shí)現(xiàn)EGF的穩(wěn)定高效釋放,達(dá)ng級(jí),可促進(jìn)MSCs增殖;對(duì)MSCs的生長(zhǎng)及分化沒有影響.4. 利用組織工程技術(shù)成功構(gòu)建組織工程皮膚,可以