組織工程皮膚新模型的刺激試驗(yàn)研究.pdf

1、目的：構(gòu)建以人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞 HaCaT為種子細(xì)胞，絲素蛋白修飾聚酯/聚酰胺的無紡布支架的組織工程皮膚模型，并與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)作對(duì)比，觀察這自制模型的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確性差別和優(yōu)劣，為該組織工程皮膚模型取代動(dòng)物模型提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1采用含血清的高糖培養(yǎng)基對(duì) HaCaT細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到80％時(shí)，接種于絲素蛋白修飾的聚酯/聚酰胺的無紡布支架上，利用掃描電鏡觀察接種后第一天、第三天 HaCaT細(xì)胞在支架上的生

2、長(zhǎng)狀況與空白支架進(jìn)行對(duì)照，檢測(cè)HaCaT細(xì)胞在支架材料上的黏附和增殖情況。2以絲素蛋白修飾的聚酯/聚酰胺無紡布為支架，熱塑形成托盤狀，大小適合于24孔板，將成纖維細(xì)胞接種培養(yǎng)4天后，再接種人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)，待3天左右細(xì)胞相互融合長(zhǎng)滿支架時(shí)將模型氣-液面培養(yǎng)2周，構(gòu)建出檢測(cè)用的組織工程皮膚模型。將培養(yǎng)不同時(shí)間的皮膚模型進(jìn)行石蠟切片并常規(guī) HE染色，觀察皮膚模型的細(xì)胞分層狀態(tài)。3從歐洲替代方法實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證中心（ECVAM）規(guī)定用于皮膚刺

3、激性的物質(zhì)中選取20種化學(xué)品，刺激物局部接觸皮膚模型后，應(yīng)用 MTT比色法測(cè)定細(xì)胞相對(duì)活力，然后收集條件培養(yǎng)基用 ELISA法檢測(cè) IL-1α因子，評(píng)價(jià)構(gòu)建的皮膚模型的靈敏度和特異性。4將20種化學(xué)品在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行急性經(jīng)皮試驗(yàn)，根據(jù)紅斑、水腫等皮膚反應(yīng)來評(píng)價(jià)化學(xué)品的皮膚刺激強(qiáng)度。
　　結(jié)果：1絲素蛋白修飾用熱塑形成托盤狀的聚酯/聚酰胺復(fù)合無紡布支架，其本身形成許多微孔結(jié)構(gòu)有一定的通透性，HaCaT細(xì)胞能在支架上良好的生長(zhǎng)并可以黏附

4、在無紡布纖維上。2將 HaCaT細(xì)胞和成纖維細(xì)胞成功接種到絲素蛋白修飾的聚酯/聚酰胺復(fù)合無紡布支架上氣-液培養(yǎng)2周后，HE染色法和掃描電鏡的觀察初步形成15層左右復(fù)層細(xì)胞層與天然細(xì)胞的層數(shù)很相似，但未形成角質(zhì)層。3選取了20種化學(xué)品在組織工程皮膚模型上成功的進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示皮膚模型的敏感性為72.7%，特異性為77.8%，準(zhǔn)確率為75%。4構(gòu)建的皮膚模型與動(dòng)物模型作對(duì)比，有4種化學(xué)品判斷出現(xiàn)錯(cuò)誤。
　　結(jié)論：1成功制備了以絲素