重組人白細胞介素-11工程菌的發(fā)酵條件研究.pdf

1、為了探討發(fā)酵條件對大腸桿菌表達人白細胞介素-11融合蛋白的影響，利用正交實驗設計，對影響工程菌的生長及重組人白細胞介素11融合蛋白的表達因素如培養(yǎng)基中的葡萄糖濃度、蛋白胨濃度、酵母提取物濃度、無機鹽濃度、pH及搖床轉(zhuǎn)速、裝液量、接種量等在搖瓶中進行了初步的研究。確定了工程菌生長及表達的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：葡萄糖lOg／L，蛋白胨20g／L，酵母提取物lOg／L，NaC110.0 g／L，KH<,2>PO<,4> 6.0 g／L，K<,2>

2、HPO<,4>3.5 g／L，MgSO<,4>3.5g／L，pH7.5，接種量10％，裝液量10％，搖床轉(zhuǎn)速220r／min及IPTG濃度0.8 mmol／L，誘導時間為4h-5h。研究了乙酸對重組菌生長及外源基因蛋白表達的影響；同時對重組菌培養(yǎng)過程中乙酸生成機制進行研究，得出供氧不足及過量的葡萄糖是導致重組菌代謝產(chǎn)生乙酸的兩個極為重要的因素。結果表明，乙酸的存在不僅導致重組菌生長速率的降低及延遲的增長，而且對外源基因產(chǎn)物的表達具有強烈

3、的抑制作用。這為工程菌的高密度培養(yǎng)及外源基因的高表達打下了基礎。在此基礎上，并在NBS BiofloⅢ-5L發(fā)酵罐中研究了重組菌的分批培養(yǎng)、重組菌的不控制溶氧的補料培養(yǎng)、重組菌的“平衡DO-stat”法補料培養(yǎng)，最后采用“平衡DO-stat”法調(diào)控補糖速率，抑制了培養(yǎng)過程中的乙酸生成，實現(xiàn)了重組菌的高密度培養(yǎng)表達，培養(yǎng)表達生物量達到55g/L(DCW)，重組人IL-11融合蛋白表達量達到33％左右。并考察了重組菌在高密度培養(yǎng)過程中質(zhì)粒的