幾種舌苔蛋白組學初步研究.pdf

1、目的：舌診是指導中醫(yī)辨證論治的重要診斷依據(jù)，舌苔是臨床察舌的主要內(nèi)容。舌苔原理及其客觀化研究是中醫(yī)現(xiàn)代化基礎研究中的一個重大關鍵性課題，伴隨人類基因組計劃的完成，人類對生命本質(zhì)與疾病的研究進人了后基因組時代。功能基因組和蛋白質(zhì)組學是現(xiàn)代生命科學的最重要的前沿領域。本研究在多年研究成果的基礎上，運用蛋白質(zhì)組學技術，基于分子整體水平開展舌苔原理的微觀辨證學研究，探討舌苔蛋白質(zhì)組及中醫(yī)證候之間的相互關系，探索舌苔與證候的分子生物學事件。

2、 方法：將觀察對象根據(jù)有無各系統(tǒng)器質(zhì)性疾病及舌苔表現(xiàn)，分為正常薄白苔、病理薄苔、厚苔、剝苔組，每例用刮勺用力刮取舌苔后離心、洗滌。以固相pH梯度等電聚焦為第一向、垂直SDS-PAGE為第二向的雙向電泳技術中的關鍵因素與環(huán)節(jié)，如樣品處理、上樣量、電泳參數(shù)、凝膠濃度和SOS凝膠電泳染色方法等進行了研究和實驗條件的優(yōu)化。并對其四組舌苔組織的蛋白質(zhì)組進行分離，銀染顯色，凝膠掃描入計算機，ImagoMaster 2D Platinum軟件分析比

3、較電泳圖譜；選擇36個差異點切下，膠內(nèi)胰酶消化后，進行質(zhì)譜(MALDL-TOF-Ms)ImageMaster 2D Platinum軟件分析獲得的二維凝膠圖像。 結(jié)果：建立并優(yōu)化了舌苔蛋白質(zhì)組雙向電泳技術，建立了舌苔蛋白質(zhì)組研究圖像分析體系，獲得了分辨率和重復性均較好的舌苔蛋白質(zhì)組雙向電泳銀染圖譜。在此基礎上對四組舌苔組織的蛋白質(zhì)組進行分離分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)凝膠中可檢測的蛋白質(zhì)斑點數(shù)分別為1082±105個、1052±85個、112

4、9±98個、1143±140個。篩選出具有明顯表達差異的36個斑點，對其36個差異蛋白質(zhì)點進行了肽質(zhì)指紋的質(zhì)譜分析鑒定，軟件對比分析確立了36種明顯差異表達的蛋白質(zhì)點，并初步確定了其等電點和分子量。對其中3個差異蛋白質(zhì)點進行了肽質(zhì)指紋的質(zhì)譜分析鑒定，查詢NCBI蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，初步鑒定了該3個蛋白質(zhì)分別為cytokeratin 13、GAL7 protein和cystatin B。 所鑒定出的蛋白質(zhì)有可能與與病理舌苔的發(fā)生、發(fā)展有