蟾毒靈抗腫瘤作用機制的蛋白組學研究.pdf

1、近來年，盡管宮頸癌的治療方案不斷改善，但它仍然是威脅女性生命的惡性腫瘤之一。蟾毒靈(bufalin)是中藥蟾酥中提取的一種活性最強的毒性配基。研究發(fā)現(xiàn)，蟾毒靈具有廣泛的抗腫瘤作用，可以誘導多種腫瘤細胞分化和凋亡。但是，蟾毒靈抗腫瘤作用的分子機制還不完全清楚，其作用靶點的蛋白質(zhì)組學研究尚未見報道。
　　本研究選用人宮頸癌HeLa細胞株作為受試對象，在確定蟾毒靈對HeLa細胞的細胞毒性的基礎上，運用蛋白質(zhì)組學技術(shù)，考察蟾毒靈作用后24

2、h的細胞總蛋白質(zhì)表達譜，找出蟾毒靈誘導的差異表達蛋白，進一步對這些蟾毒靈的可能蛋白靶點進行驗證并分析蟾毒靈可能作用機制。MTT試驗結(jié)果表明蟾毒靈對HeLa細胞具有較強的細胞毒作用，其IC50值為154±21.5 nmol·L-1（24 h）；流式細胞分析結(jié)果和細胞核形態(tài)觀察表明蟾毒靈可以誘導細胞凋亡；應用蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳對蟾毒靈作用于 HeLa細胞24h后的蛋白質(zhì)表達譜進行分析，找出差異蛋白點；利用基質(zhì)輔助激光解吸飛行時間質(zhì)譜鑒定差異

3、蛋白點。共鑒定出11個差異表達蛋白點，包括2個上調(diào)的蛋白點RibosomaL protein、S-Adenosylmethionine Synthetase2和9個下調(diào)的蛋白點nudix-type motif5、vimentin、hnRNP C1/hnRNP C2 variant、hnrpK、hnrpK isoform a variant（兩個點均為此蛋白）、HSP27、macrophage-capping protein、SELENB