蟾毒靈抗腫瘤作用機(jī)制的蛋白組學(xué)研究.pdf

1、近來年，盡管宮頸癌的治療方案不斷改善，但它仍然是威脅女性生命的惡性腫瘤之一。蟾毒靈(bufalin)是中藥蟾酥中提取的一種活性最強(qiáng)的毒性配基。研究發(fā)現(xiàn)，蟾毒靈具有廣泛的抗腫瘤作用，可以誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞分化和凋亡。但是，蟾毒靈抗腫瘤作用的分子機(jī)制還不完全清楚，其作用靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究尚未見報(bào)道。
　　本研究選用人宮頸癌HeLa細(xì)胞株作為受試對(duì)象，在確定蟾毒靈對(duì)HeLa細(xì)胞的細(xì)胞毒性的基礎(chǔ)上，運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，考察蟾毒靈作用后24

2、h的細(xì)胞總蛋白質(zhì)表達(dá)譜，找出蟾毒靈誘導(dǎo)的差異表達(dá)蛋白，進(jìn)一步對(duì)這些蟾毒靈的可能蛋白靶點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證并分析蟾毒靈可能作用機(jī)制。MTT試驗(yàn)結(jié)果表明蟾毒靈對(duì)HeLa細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒作用，其IC50值為154±21.5 nmol·L-1（24 h）；流式細(xì)胞分析結(jié)果和細(xì)胞核形態(tài)觀察表明蟾毒靈可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；應(yīng)用蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳對(duì)蟾毒靈作用于 HeLa細(xì)胞24h后的蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行分析，找出差異蛋白點(diǎn)；利用基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定差異

3、蛋白點(diǎn)。共鑒定出11個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)，包括2個(gè)上調(diào)的蛋白點(diǎn)RibosomaL protein、S-Adenosylmethionine Synthetase2和9個(gè)下調(diào)的蛋白點(diǎn)nudix-type motif5、vimentin、hnRNP C1/hnRNP C2 variant、hnrpK、hnrpK isoform a variant（兩個(gè)點(diǎn)均為此蛋白）、HSP27、macrophage-capping protein、SELENB