枳菊解郁湯對抑郁小鼠學(xué)習(xí)記憶及NCAM表達的影響.pdf

1、本研究采用（高臺、電擊足底、斜籠實驗、禁水、禁食、冷水刺激、通宵照明）多因素慢性不可預(yù)知應(yīng)激建立抑郁動物模型，應(yīng)激持續(xù)21天，并對各組小鼠采用中藥復(fù)方枳菊解郁湯以及單味藥物枳實和石菖蒲進行灌胃處理。將青年小鼠分為對照組，模型組，中藥復(fù)方組、氟西汀組、與兩個單味藥枳實組與石菖蒲組。采用開場實驗檢測小鼠自發(fā)活動和探究行為，采用懸尾實驗檢測小鼠情緒行為變化，采用Morris水迷宮實驗檢測小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的變化；進行酶活實驗，檢測小鼠海馬及

2、前腦皮層CAT和MAO活性變化；HE染色，觀察小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)元形態(tài)學(xué)改變；采用免疫組化檢測神經(jīng)細胞黏附分子（neural cell adhesion molecule，NCAM）在海馬和前腦皮層表達，以探討中藥復(fù)方的抗抑郁作用及其機制。
　　實驗結(jié)果：
　　1．開場行為：模型組小鼠與對照組相比，直立次數(shù)、穿越格數(shù)、修飾次數(shù)均減少，中央格停留時間延長，排便粒數(shù)增多。相比于模型組小鼠，中藥復(fù)方枳菊解郁湯能夠改善抑郁小鼠對

3、新環(huán)境的適應(yīng)能力，自發(fā)活動和探究行為，緩解對新環(huán)境的緊張情緒，而其中的單味藥枳實，石菖蒲對小鼠的開場行為改善效果較弱。
　　2．懸尾實驗：相比于對照組小鼠，模型組小鼠后4分鐘累積不動時間增加，第一次靜止不動時間顯著減小。相比于模型組小鼠，氟西汀組、中藥復(fù)方組小鼠后四分鐘累計不動時間減少，第一次靜止不動時間明顯增加，絕望程度得到緩解；而枳實組與石菖蒲組小鼠第一次靜止不動時間與累積不動時間則無顯著性差異。
　　3．水迷宮實驗：相

4、比于對照組小鼠，定位航行實驗中模型組小鼠尋找平臺的時間顯著延長；空間搜索實驗中，模型組小鼠在平臺象限停留時間顯著減少。相比于模型組小鼠，氟西汀組、中藥復(fù)方枳菊解郁湯組小鼠逃避潛伏期均明顯減少。氟西汀組、中藥復(fù)方組小鼠在平臺象限停留的時間明顯增加。而枳實組與石菖蒲組并沒有得到明顯改善。
　　4．酶活性實驗：與對照組小鼠相比，模型組小鼠腦內(nèi)CAT活性顯著降低、MAO活性明顯升高；相比于模型組小鼠，氟西汀組與中藥復(fù)方組小鼠腦內(nèi)CAT活性

5、明顯升高，MAO的活性明顯降低，然而枳實組小鼠與石菖蒲組小鼠CAT活性與MAO活性并無顯著性差異。
　　5．HE染色：對照組、氟西汀組和中藥復(fù)方組小鼠海馬CA1、CA3與DG區(qū)細胞數(shù)量較多，沒有或者極少的變形細胞，大小基本相同，細胞結(jié)構(gòu)比較完整，細胞排列整齊緊密，細胞核基本位于細胞的中央，結(jié)構(gòu)明顯并且邊緣清楚。細胞核染色比較深。前腦皮層神經(jīng)元細胞排列整齊，形態(tài)規(guī)整并且染色清晰，少有細胞變形現(xiàn)象。
　　模型組、枳實組以及石菖蒲

6、組小鼠海馬CA1，CA3區(qū)的神經(jīng)細胞出現(xiàn)萎縮，并且出現(xiàn)了變形，細胞數(shù)量減少，細胞之間的空隙變大，胞核固縮等現(xiàn)象。前腦皮層細胞出現(xiàn)在形態(tài)不規(guī)則現(xiàn)象，數(shù)量減少并且層次松散，出現(xiàn)三角形細胞和梭形細胞，細胞與細胞出現(xiàn)中斷現(xiàn)象，染色淡并且著色不勻。
　　6. NCAM免疫組化：與對照組小鼠相比，模型組小鼠NCAM陽性細胞數(shù)在海馬各區(qū)和前腦皮層均明顯減少，平均目標(biāo)灰度值增大，表達明顯減弱。相比于模型組小鼠，NCAM陽性細胞數(shù)在氟西汀組和中藥復(fù)

7、方組小鼠在海馬DG區(qū)和前腦皮層表達較多，平均目標(biāo)灰度值降低，但在海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)的表達相對較少；枳實組與石菖蒲組NCAM陽性細胞數(shù)相對較少。
　　實驗結(jié)論：
　　1.中藥復(fù)方枳菊解郁湯明顯改善由慢性應(yīng)激導(dǎo)致的小鼠抑郁樣行為；顯著增強抑郁模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，表現(xiàn)出一定的抗抑郁作用。
　　2.中藥復(fù)方枳菊解郁湯能夠明顯提高抑郁模型小鼠CAT活性和降低MAO活性，以減弱神經(jīng)元的損傷。
　　3.中藥復(fù)方枳菊解郁