恐傷母鼠對其仔鼠空間學習記憶能力的影響及其神經(jīng)發(fā)生機制.pdf

1、　　目的
　　采用旁觀電擊法、危境求生法以及模擬地震法制備慢性單純的恐傷母鼠動物模型,通過觀察母鼠的一般情況、孕產(chǎn)情況以及仔鼠生長發(fā)育情況,檢測仔鼠空間學習和記憶能力以及海馬區(qū)形態(tài)學、分子生物學變化,篩選出最佳的造模方法,并初步探討恐傷母鼠對其仔鼠空間學習和記憶能力的影響及其發(fā)生的分子機制。
　　方法
　　2月齡SPF級 Wistar大鼠,體重 180±20 g,其中雌鼠 60只,雄鼠 40只。按隨機數(shù)字表法把6

2、0只雌鼠分為旁觀電擊組、危境求生組、模擬地震組和空白對照組,每組15只。從40只雄鼠中選出體重較大的 30只作為交配鼠,剩余10只作為電擊鼠。旁觀電擊組自造模第1d起于9AM將電擊鼠和旁觀鼠放入自制交流箱相應的小室內(nèi),電擊10次/d,3min/次；危境求生組自造模第1d起于9 AM將求生鼠放入的自制危境箱內(nèi),1次/d,30min/次；模擬地震組自造模第1d起于9 AM將其置于氣浴振蕩器內(nèi),10次/d,3min/次。第15d起于9 PM按

3、雌雄2：1合籠,次日 7 AM 檢查受孕情況,造模持續(xù)到孕第 19d。造模期間空白對照組雌鼠置于安靜的環(huán)境內(nèi)30min。母鼠生產(chǎn)后每組抽取10窩每窩8只仔鼠進行喂養(yǎng)和實驗。每組每窩仔鼠于第14、21d分別隨機取出2只,解剖取海馬組織以備檢測,每組每窩仔鼠于1月齡分別取出2只進行Morris水迷宮實驗。觀察及檢測指標：( 1)母鼠的一般情況和孕產(chǎn)情況；(2)仔鼠的翻身、出牙等生長發(fā)育情況；(3)在電鏡下觀察 14 日齡、21 日齡的仔鼠海

4、馬區(qū)神經(jīng)細胞突觸結(jié)構(gòu)的改變；( 4)采用免疫組化法檢測21日齡仔鼠海馬CA3區(qū)的p-CREB、SYN-1的蛋白表達情況。(5)應用Morris水迷宮實驗測試1月齡仔鼠空間學習和記憶能力。
　　結(jié)果
　　1恐傷母鼠動物模型的制備：成功制備三種慢性單純的恐傷母鼠動物模型。
　　2恐傷母鼠一般狀況的變化：與空白對照組比較,模型組雌鼠皮毛色澤情況、反應敏捷度、活動靈活度、精神狀態(tài)都明顯的異常,按旁觀電擊組、危境求生組、模

5、擬地震組順序異常程度依次減弱。
　　3 母鼠的孕產(chǎn)情況：與空白對照組比較,模型組的產(chǎn)仔數(shù)減少,差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；但各模型組產(chǎn)仔數(shù),孕鼠數(shù)以及產(chǎn)仔孕鼠數(shù)各組間的差別均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　4 恐傷母鼠其仔鼠的生長情況：與空白對照組比較,模型組的仔鼠翻身、出牙和開眼時間都延長,差別均有統(tǒng)計學意義( P<0.05)；模型組間比較,差別均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　5 恐傷母鼠其仔

6、鼠海馬區(qū)神經(jīng)細胞突觸結(jié)構(gòu)的改變：模型組仔鼠海馬區(qū)腦神經(jīng)細胞突觸小泡、線粒體都有不同程度的改變,按旁觀電擊組、危境求生組、模擬地震組順序改變程度依次減弱。
　　6 恐傷母鼠其 21 日齡仔鼠海馬 CA3 區(qū) p-CREB、SYN-1 蛋白表達情況：與空白對照組比較,旁觀電擊組、危境求生組兩種蛋白表達減弱,差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),模擬地震組的差別均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與旁觀電擊組比較,模擬地震組兩種蛋白表達增強

7、差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),危境求生組的差別均無統(tǒng)計學意義( P>0.05)；與危境求生組比較,模擬地震組兩種蛋白表達增強,差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　7 恐傷母鼠對其 1 月齡仔鼠空間學習和記憶能力的影響：(1)與空白對照組比較,旁觀電擊組 4天的平均潛伏期均延長,差別有統(tǒng)計學意義( P<0.05),危境求生組和模擬地震組第1天的平均潛伏期延長,其余三天縮短,差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與旁觀電擊組

8、比較,各組4天的平均潛伏期均縮短,差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；危境求生組與模擬地震組比較,4 天的平均潛伏期差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(2)組間的搜索策略差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.208, P=0.042)；與空白對照組比較,旁觀電擊組仔鼠較多采用非有效策略,較少采用有效策略方式的搜索策略,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5 .104,P=0.024),其余各組間的搜索策略差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(3)與空白對照組比較

9、,旁觀電擊組仔鼠平均游泳速度減慢、在20%邊緣區(qū)平均百分比增大,在其他區(qū)域平均百分比減小,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；模擬地震組平均游泳速度減慢,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其余差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與旁觀電擊組比較,危境求生組平均游泳速度、在20%邊緣區(qū)還有其他區(qū)域的差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),模擬地震組差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；危境求生組與模擬地震組的差異均無統(tǒng)計學意義( P>0.05)

10、。
　　結(jié)論
　　1 三種慢性單純的恐傷腎動物造模方法中,旁觀電擊法制備的模型最適合。
　　2 恐傷母鼠不僅可影響自身的產(chǎn)仔情況,還可導致仔鼠空間學習和記憶能力降低以及海馬區(qū)神經(jīng)細胞突觸和蛋白表達的改變。
　　3 恐傷母鼠對其仔鼠空間學習和記憶能力以及海馬神經(jīng)突觸的影響其可能機制：恐傷母鼠可使仔鼠海馬 CA3 區(qū)的 p-CERB 數(shù)量減少,從而引起下游 SYN-1的表達減少,進而影響海馬神經(jīng)突觸的改變,最