香葉木素取代物調(diào)控靜脈血栓蛋白質組及靶蛋白的探索.pdf

1、蓬子菜是中國東北的一種野生植物，這種植物以它是維生素的優(yōu)良的食物來源而著稱，它還包含綠原酸，水楊酸和黃酮類等物質。報道蓬子菜的抗靜脈血栓活性值比其它植物特別是黃酮豐富的植物要高，通過高效液相色譜法（反相液相色譜）從蓬子菜中分離得到的香葉木素取代物已被鑒定為抗血栓的藥效物質。本研究通過分析蓬子菜中香葉木素取代物作用于靜脈血栓的血漿蛋白質組的變化，以期尋找香葉木素取代物作用于靜脈血栓的生物標記和靶蛋白，為將其作為先導化合物提供理論依據(jù)。

2、r>　　實驗選取Wistar大鼠隨機分為對照組，模型組和預防組三個組，其中對照組不進行任何處理，模型組只建立了體外靜脈血栓模型而預防組是腹腔注射香葉木素取代物后，然后建立體外靜脈血栓模型，采用病理學檢查進行驗證，對亞洲人常見的蛋白c進行了分析，結果表明在血栓形成過程中，蛋白c起到了滅活活化的凝血因子，促進纖維蛋白溶解，減輕內(nèi)皮細胞的損傷的作用，這與電鏡分析的結果一致，驗證了血栓動物模型建立成功。采用雙向電泳與高效液相色譜法相結合的方法進

3、行蛋白質組分析，血漿蛋白通過高速離心分離提取，采用Sephadex柱層析和低豐度蛋白富集試劑盒進行分離，以去除免疫球蛋白等的高豐度蛋白質。對低豐度蛋白質進行雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳，用PDquest軟件進行圖像分析，尋找差異表達的蛋白質。
　　分別對空白組，模型組和預防組的2-DE圖像進行比較和分析，模型組中一共有147個蛋白點，預防中一共有99個蛋白點；和模型組比較，預防組共有49個差異蛋白點表達，其中表達上調(diào)2倍的蛋白點有28個

4、，表達下降2倍的蛋白點有21個；在模型組中差異表達的有56個蛋白點，在預防組中差異表達的有有8個蛋白點。經(jīng)過基質輔助激光解析飛行時間質譜分析后，成功鑒定了13個靶蛋白(10個已知蛋白，3個未知蛋白)，其中匹配率較高的靶蛋白是 Full=Serum albumin； Flags： Precursor，serum albumin precursor，glutathione S-transferase pi，albumin isoform C