水溶性龍牙百合多糖的純化、一級結構及其生物活性研究.pdf

1、百合是衛(wèi)生部審批通過的首批藥食兩用品，國內(nèi)外學者對百合多糖進行了初步研究，發(fā)現(xiàn)它們具有降血糖、抗氧化等生物活性。但大多數(shù)活性研究是以百合多糖的粗提物為物質(zhì)基礎進行的。目前對于百合多糖結構與構象的研究不多，同時由于研究者在材料選擇和方法的選用上存在差異，對百合多糖研究所得的結果也不盡相同。本文在國內(nèi)外最新研究成果的基礎上，綜合應用分析化學及現(xiàn)代儀器分析等一系列現(xiàn)代研究方法和技術手段，系統(tǒng)地研究了從龍牙百合中提取純化出來的百合多糖LLP1、

2、LLP2的組成、結構及其構象，并對其部分活性進行了初步研究?，F(xiàn)將本文主要研究結果歸納如下。 1.確定了測定和計算百合多糖含量的方法。采用葸酮.硫酸比色法結合換算因子來測定和計算百合中多糖含量，其數(shù)據(jù)可靠，該方法重現(xiàn)性較好，較能反應多糖的真實含量，適合于百合中多糖含量的測定。用該法測得百合多糖的換算因子f=2.718，新鮮龍牙百合鱗莖中多糖平均含量為28.18％。 2.采用現(xiàn)代分離分析手段建立了百合多糖的優(yōu)選純化工藝、純度

3、鑒定和分子量測定方法。采用DEAE-SepharoseFastFlow離子交換層析(4.6cm×80cm)對百合水提物進行純化，得到兩個組分LLP1、LLP2(LongyaLilyPolysaccharide)。經(jīng)高效液相凝膠滲透色譜檢測發(fā)現(xiàn)LLP1為單一對稱色譜峰，紫外280nm處無吸收峰，純度大于98％，表明該組分為均一多糖組分，重均分子量Mw1為11756Dal.；LLP2為單一對稱色譜峰，紫外280nm和示差檢測的出峰時間相差很

4、小，純度98％，表明該組分可能是糖.蛋白復合物，重均分子量Mw2為1038773Dal.。研究表明DEAE-SepharoseFastFlow離子交換層析(4.6cm×80cm)純化速度快，方法簡便，效率高，且能方便放大生產(chǎn)。 3.對LLP1、LLP2的理化性質(zhì)進行了研究，發(fā)現(xiàn)LLP1為白色絮狀固體，極易吸潮，溶于水和二甲亞砜，尤易溶于熱水，不溶于高濃度乙醇、丙酮等有機溶劑，水溶液呈透明粘稠狀，Molish反應、蒽酮-硫酸反應和

5、硫酸-咔唑反應顯示有糖及糖醛酸存在，考馬斯亮藍反應顯示不含蛋白質(zhì)。LLP2為淡黃色絮狀固體，易吸潮，不易溶于冷水，易溶于熱水和二甲亞砜，不溶于乙醇、丙酮等有機溶劑，水溶液呈半透明狀，粘性極強，Molish反應、蒽酮-硫酸反應、硫酸-咔唑反應顯示有糖及糖醛酸存在；考馬斯亮藍反應顯示有蛋白質(zhì)存在。同時研究了兩種多糖在溶液中的構象，I2-KI反應發(fā)現(xiàn)兩種多糖可能存在較長的側鏈和較多的分枝；剛果紅反應結果表明LLP1、LLP2不具有三股螺旋結構

6、。 4.采用現(xiàn)代化學及儀器分析方法(硫酸-咔唑法、GC法、高碘酸氧化、Smith降解、紅外光譜和NMR法等)，首次解析了LLP1、LLP2的一級結構。LLP1單糖組成的摩爾比為Glc：Man：Ara=18.60：25.14：1.00；糖醛酸和中性糖含量分別為4.02％、94.08％；LLP1不含甲基糖，主鏈由甘露糖和葡萄糖組成，葡萄糖殘基的連接方式有1，4-linkedGlcp和1，6-linkedGlcp，糖鏈中有末端葡萄糖殘

7、基，甘露糖以1，3-linkedManp方式連接。側鏈則由阿拉伯糖和糖醛酸組成。它們都以α形式連接。 LLP2的單糖組成摩爾比為Gal:Rha：Ara=3.58:1.00:1.09，糖醛酸和中性糖含量分別為77.13％、19.46％，蛋白質(zhì)1.60％；高碘酸氧化與Smith降解結果顯示LLP2中沒有1→6糖苷鍵，含有1→4糖苷鍵；LLP2不含甲基糖，主鏈由糖醛酸以1→4方式連接組成，在糖醛酸的3-位有可能形成側鏈。側鏈由半乳糖、

8、阿拉伯糖和鼠李糖組成，半乳糖殘基以1→4方式連接。它們都以α形式連接。 5.通過四種不同體系(對α-淀粉酶的抑制作用、DPPH·自由基、超氧陰離子和羥基自由基)研究了百合多糖LLP1、LLP2的生物活性。結果顯示，LLP1、LLP2濃度增加，對α-淀粉酶的抑制率會提高，且在相同濃度條件下，LLP2比LLP1的抑制作用要顯著；LLP1對DPPH·無清除作用，對超氧陰離子自由基幾乎無清除能力，而對·OH自由基有較強的清除作用；LLP