貽貝蒸煮液水溶性多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)分析和活性研究.pdf

1、貽貝蒸煮液由新鮮貽貝的煮汁經(jīng)24小時加熱濃縮而成,其中含有大量的可溶性蛋白質(zhì)、糖類等營養(yǎng)物質(zhì)和功能性成份。將貽貝蒸煮液中的水溶性多糖進行分離純化,進而研究它們的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)及活性,以期達(dá)到資源的有效利用、經(jīng)濟效益的提高和新功能性食品的開發(fā)等目的。 首先,通過化學(xué)分析法對貽貝蒸煮液原料中基本成分進行分析。接著,采用乙醇沉淀、Sevage+木瓜蛋白酶法除蛋白、活性炭脫色從貽貝蒸煮液中分離出水溶性粗多糖MJPs,再經(jīng)瓊脂糖凝膠Sep

2、harose4B柱層析和透析,純化得到兩種貽貝蒸煮液水溶性多糖MJPs Ⅰ和MJPs Ⅱ。經(jīng)紫外掃描、醋酸纖維薄膜電泳、高效凝膠滲透色譜等方法檢驗它們的均一性。將得到的均一多糖MJPs I和MJPs II用苯酚-硫酸法測定總糖含量,高效凝膠滲透色譜法測定分子量,并利用氣相色譜、紅外光譜和核磁共振光譜,確定它們的初級結(jié)構(gòu)。通過抑菌杯法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法和DPPH·抑制率法分別測定貽貝蒸煮液和水溶性粗多糖MJPs的體外抑菌、體外NaNO2清除及N

3、DMA合成阻斷以及體外抗氧化活性,并對MJPs Ⅰ和MJPs Ⅱ的免疫學(xué)活性、抗腫瘤活性和抑制黑色素生成活性進行測定。 實驗結(jié)果表明,貽貝蒸煮液原料中糖類主要以非還原糖的形式存在,純化得到的水溶性多糖MJPs Ⅰ和MJPs Ⅱ經(jīng)檢驗為均一多糖。通過結(jié)構(gòu)分析得到,MJPs Ⅰ主要由葡萄糖組成,平均分子量大于2.0×106Da,推測其結(jié)構(gòu)為： {→[3)-α-D-Glcp-(1]10→3)-β-D-Glcp-(1→}n;

4、 4 ↑ α-D-Glcp-2MJPs II主要由葡萄糖組成,平均分子量亦大于2.0×106Da,推測其結(jié)構(gòu)為：{→2)-α-D-Glcp-(1→}n。 在抑菌活性實驗中,貽貝蒸煮液及MJPs對4種供試菌金黃色葡萄球菌、酵母菌、大腸桿菌和副溶血性弧菌均無明顯抑制作用；在體外NaNO2清除及NDMA合成阻斷實驗中,貽貝蒸煮液對NaNO2的清除作用和NDMA合成阻斷作用極為顯著,但是MJPs對NaNO2的清除和N

5、DMA合成阻斷活性不顯著；在體外抗氧化實驗中,貽貝蒸煮液(以可溶性固形物計)的IC50為3.80μg/mL,MJPs的IC50為1.12μg/mL,TBHQ的IC50為7.55μg/mL,MJPs的最大抑制率59.9％不如TBHQ的最大抑制率89.9％高,但是其-IC50明顯優(yōu)于TBHQ。MJPs I對小鼠T、B淋巴細(xì)胞有顯著的正向調(diào)節(jié)作用,MJPs II在低劑量下對小鼠B淋巴細(xì)胞有顯著的負(fù)向調(diào)節(jié)作用,在高劑量下對小鼠T淋巴細(xì)胞表現(xiàn)出正