硫酸酯化蘋果渣水溶性多糖結(jié)構(gòu)表征和生物活性研究.pdf

1、蘋果渣是蘋果汁加工業(yè)的副產(chǎn)物，含有大量膳食纖維，擠壓改性可提高膳食纖維中水溶性多糖的比例。通過對這些水溶性多糖進(jìn)行硫酸酯化修飾，可改善多糖生理活性，對提高蘋果渣綜合利用有深遠(yuǎn)意義。
　　本文對蘋果渣進(jìn)行擠壓改性提取水溶性多糖（APP），首先采用氨基磺酸-N,N-二甲基甲酰胺法對多糖進(jìn)行硫酸酯化修飾，并對修飾后的多糖采用DEAE-52纖維素柱層析進(jìn)行分離純化；其次，測定酯化前后多糖的微觀形態(tài)和化學(xué)結(jié)構(gòu)；最后，通過體外抗氧化活性和三種

2、腫瘤細(xì)胞（RKO、MDA-MB-231和HepG2）的抑制作用評價其生理活性，探討其化學(xué)結(jié)構(gòu)和生理活性之間的關(guān)系。主要研究結(jié)果如下：
　?。?）APP經(jīng)硫酸酯化修飾后得到SAPP，取代度為0.92。SAPP經(jīng)純化后得到SAPP-1、SAPP-2和SAPP-3三種組分，取代度分別為0.19、0.63、0.97。
　?。?）由紫外和紅外光譜可知，SAPP、SAPP-1、SAPP-2和SAPP-3均具有硫酸酯化后的特征吸收峰；單糖

3、組成分析發(fā)現(xiàn)五種多糖均含有鼠李糖、巖藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖；對分子量測定發(fā)現(xiàn)APP、SAPP、SAPP-1、SAPP-2和SAPP-3的分子量分別為61.9kDa、68.2kDa、65.5kDa、67.0kDa、51.4kDa；通過高碘酸氧化實驗發(fā)現(xiàn)五種多糖均存1→6糖苷鍵，同時還存在1→2或1→4糖苷鍵；而核磁結(jié)果可知硫酸酯化修飾后，硫酸基團(tuán)結(jié)合位點均發(fā)生在 C-6位和C-2位。通過掃描電鏡可知，未硫酸化的APP

4、顆粒較大，呈片狀結(jié)構(gòu)致密，表面平整，硫酸酯化修飾后的SAPP及純化后組分顆粒變小，形態(tài)各異，表面粗糙，表面積增大。
　?。?）對還原力進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)硫酸酯化修飾能顯著提高多糖的還原力，且取代度較大的SAPP-3的還原能力較強(qiáng)，濃度在2.5mg/mL時的Vc當(dāng)量為214.4μg/mL，較硫酸化前（46.5μg/mL）提高了4.6倍；抗氧化分析結(jié)果表明取代度較大的SAPP-3同樣對自由基有較高的清除能力，在濃度為2.5mg/mL時，對

5、DPPH自由基清除率為77.1％，超氧陰離子自由基清除率為62.4%。對羥自由基清除率為67.9%。對對ABTS+?自由基的清除率為75.4%。
　　（4）抗腫瘤測定結(jié)果表明硫酸酯化前后對腫瘤細(xì)胞RKO、MDA-MB-231和HepG2細(xì)胞均有一定的抑制作用，且對HepG2更為敏感，硫酸酯化后多糖較未酯化多糖對三種腫瘤細(xì)胞的抑制率均有所增加，但整體作用較弱，對三株腫瘤細(xì)胞的最大抑制率分別為34.59%（SAPP-3）、32.16%