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文檔簡介
1、香菇多糖系從香菇子實體中提取純化而得到的高分子葡聚糖,是一種宿主免疫增強劑,具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和刺激干擾素形成等功能。目前研究較多的為堿提高分子量香菇多糖,水提香菇多糖的研究較為少見。本課題以香菇子實體為原料,采用水提醇沉、過氧化氫脫色和超濾法分級分離得到三種均一分子量水溶性精制香菇多糖組分,分別命名為 LTP1、LTP2和LTP3,并在此基礎(chǔ)上進一步研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)、糖鏈構(gòu)象及體內(nèi)外抗腫瘤活性。
文章從以下三部分就水
2、溶性香菇多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)分析及體內(nèi)外抗腫瘤活性研究進行了綜述。
第一部分水溶性香菇多糖的提取、分離和純化
以房縣小花菇為原料,采用熱水提取、乙醇沉淀法從香菇子實體中提取香菇粗多糖,經(jīng)過過氧化氫脫色和超濾法分級分離得到三種水溶性精制香菇多糖組分;通過對各組分進行糖含量測定、相對分子質(zhì)量檢測、碘-碘化鉀試驗及紫外掃描鑒定其純度;通過元素分析、比旋光度測定和糖類物質(zhì)定性鑒別試驗分析其理化性質(zhì)。經(jīng)分離純化得到三種精制香菇
3、多糖組分LTP1、LTP2和LTP3,苯酚-硫酸法測得糖含量分別為98.86%、100.73%和99.03%,高效凝膠色譜法測得相對分子質(zhì)量分別為6.621×105 Da、3.062×105 Da和9.055×104 Da,碘-碘化鉀試驗及紫外掃描圖譜顯示各組分均不含淀粉、蛋白質(zhì)和核酸;元素分析顯示C:H:O≈1:2:1,比旋光度([α]20D)分別為+46.278、-6.330、-5.500,定性鑒別試驗說明三者均為糖類物質(zhì),且不含還
4、原糖。因此,本課題制得的水溶性精制香菇多糖LTP1、LTP2和LTP3為分子量均一、高純度的多糖組分。
第二部分水溶性香菇多糖的結(jié)構(gòu)分析
采用完全酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化分析等化學(xué)方法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、傅立葉紅外光譜法及核磁共振波譜技術(shù)等波譜學(xué)方法綜合分析LTP1、LTP2和LTP3的一級結(jié)構(gòu),采用剛果紅實驗對其糖鏈構(gòu)象進行初步研究。完全酸水解結(jié)果顯示三者均由D-葡萄糖組成;綜合分析高碘酸氧
5、化、Smith降解和甲基化結(jié)果可知,LTP1、LTP2和LTP3的糖殘基連接類型均包括末端、(1-3)、(1-4)、(1-6)和(1-3-6)連接,其中,(1-4)連接類型含量很少,末端、(1-3)、(1-6)和(1-3-6)連接的摩爾比分別近似于1:2:1:2、1:2:2:2、1:1:5:1;核磁共振波譜顯示LTP1、LTP2和LTP3的水解產(chǎn)物L(fēng)TP1-p、LTP2-p和LTP3-p可能分別含有六種、七種、八種類型的糖殘基;紅外光譜
6、顯示 LTP1、LTP2和LTP3均為多糖類物質(zhì),LTP1含有α和β兩種構(gòu)型的糖苷鍵,以α構(gòu)型為主,而LTP2和LTP3均只含有β構(gòu)型的糖苷鍵,三者均為D-吡喃葡萄糖環(huán)結(jié)構(gòu);剛果紅實驗結(jié)果表明LTP1具有三股螺旋構(gòu)象,LTP2和LTP3的空間構(gòu)象有待于進一步研究。
第三部分水溶性香菇多糖的體內(nèi)外抗腫瘤活性研究
以體外培養(yǎng)法分別探討LTP1、LTP2和LTP3對小鼠肝癌細胞H22、小鼠肉瘤細胞S180、人乳腺癌細胞MC
7、F-7及人白血病細胞K562增殖的抑制作用,采用MTT比色法檢測其抑制率;以 S180荷瘤小鼠為模型進行體內(nèi)抗腫瘤實驗,探討精制香菇多糖LTP1的體內(nèi)抑瘤作用及其對免疫器官的影響。結(jié)果顯示LTP1和LTP2對H22、S180、MCF-7和K562細胞體外增殖均具有抑制作用,但對K562的抑制作用較弱,LTP3僅對H22和S180細胞體外增殖有抑制作用,三個組分的體外抗腫瘤活性總體呈劑量依賴性,且LTP1的活性明顯高于LTP2和LTP3;
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