遲緩愛(ài)德華氏菌對(duì)血漿應(yīng)激的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、愛(ài)德華氏菌病是目前全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)最具威脅的疾病之一，其病原菌主要是遲緩愛(ài)德華氏菌。該菌宿主范圍十分廣泛，除了感染魚(yú)類，還可以感染兩棲類、爬行類、哺乳類動(dòng)物以及人類。遲緩愛(ài)德華氏菌是細(xì)胞內(nèi)寄生菌，能夠侵入宿主細(xì)胞內(nèi)，在其中生長(zhǎng)繁殖，并最終導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)膜的裂解，這種胞內(nèi)寄生特性對(duì)其致病性具有重要作用。本論文旨在研究遲緩愛(ài)德華氏菌與血漿的相互作用，有助于闡明病原菌侵染機(jī)理，對(duì)病原菌致病機(jī)理的研究具有理論意義。
　　 本文通過(guò)病原菌與宿主

2、的血漿非特異性免疫系統(tǒng)的相互作用，探討血漿處理后的細(xì)菌蛋白質(zhì)功能復(fù)合物組的變化。首先，我們采用2D Native/SDS-PAGE技術(shù)，建立了遲緩愛(ài)德華氏菌全菌蛋白圖譜，通過(guò)蛋白質(zhì)功能分析，共鑒定出14個(gè)異聚體復(fù)合物和11個(gè)同聚體復(fù)合物。本結(jié)果為進(jìn)一步研究血漿處理后蛋白質(zhì)相互作用組的鑒定提供基礎(chǔ)，有助于全面理解病原菌與血漿的相互作用情況。
　　 其次，以遲緩愛(ài)德華氏菌為主要研究對(duì)象，以大腸桿菌為研究對(duì)照，采用人和魚(yú)血漿對(duì)這兩種細(xì)

3、菌進(jìn)行處理。采用OD值以及活菌計(jì)數(shù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)血漿處理后遲緩愛(ài)德華氏菌存活能力增強(qiáng)，血漿促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng)；大腸桿菌存活能力減弱，該菌能夠被血漿溶菌。將血漿處理后的細(xì)菌蛋白進(jìn)行2D IEF/SDS-PAGE和2DNative/SDS-PAGE分析，遲緩愛(ài)德華氏菌存在差異蛋白共15個(gè)，分別是LamB、OmpA、YihK、GpmA、AccC、PflB、Pnp、HemB、PurB2、ETAE1024、DnaK、Tuff、Pnp、ClpB、lleS。其

4、中OmpA，YihK已有文獻(xiàn)證實(shí)與細(xì)菌的血漿抗性有關(guān)，其余13個(gè)蛋白質(zhì)為本文首次報(bào)道。大腸桿菌存在差異蛋白共14個(gè)，依次為DnaK、TrbC、YgcM、Tsf、CysK、LpdA、MalP、GlnA、DeoC、RpoB、RpsA、SerS、FbaB、GlpQ。比較這兩種細(xì)菌的差異點(diǎn)蛋白質(zhì)，主要參與不同的生命代謝活動(dòng)，其中遲緩愛(ài)德華氏菌的丙酮酸代謝發(fā)生變化，蛋白質(zhì)合成減弱，糖酵解過(guò)程加強(qiáng)，而E.coli的糖酵解途徑受到抑制，遺傳信息處理受