雷帕霉素對(duì)膿毒癥大鼠肝臟損害的保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：氧化應(yīng)激是膿毒癥誘發(fā)肝臟損害的關(guān)鍵因素。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）在氧化應(yīng)激過(guò)程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。本文觀察 mTOR抑制劑雷帕霉素對(duì)膿毒癥大鼠肝損害的保護(hù)作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：60只 Wistar雄性大鼠隨機(jī)分成三組：假手術(shù)組（10只）、膿毒癥組（10只）、膿毒癥+雷帕霉素組（20只）和膿毒癥+PBS組（20只）。采用盲

2、腸結(jié)扎穿刺法（cecal ligation and puncture, CLP）制作膿毒癥模型。在實(shí)驗(yàn)前2h進(jìn)行雷帕霉素（1mg/kg/d）灌胃處理，對(duì)照組采用同等劑量的PBS處理。大鼠眼眶取血，采用終點(diǎn)法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)（3、6、12、24h）血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平；雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清氧化應(yīng)激標(biāo)志物8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosi

3、ne，8-OHdG)的水平；提取肝臟組織制備10％的勻漿液，離心后取上清液檢測(cè)8-OhdG；并檢測(cè)肝臟組織超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(catalase, CAT)的活性和丙二醛（malonaldehyde, MDA）含量，采用實(shí)時(shí)定量PCR（Real-Time PCR）檢測(cè)mTOR的表達(dá)；蛋白免疫印跡法

4、（Western-blot）檢測(cè)mTOR、核糖體S6蛋白激酶（S6 kinase, S6K）、磷酸化核糖體S6蛋白激酶（p-S6K）、蛋白激酶 B（AKT）和磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）的含量。不同濃度雷帕霉素（0、10、20、40μM）預(yù)處理HepG2細(xì)胞4h后，用200μM過(guò)氧化氫（H2O2）處理細(xì)胞3h。DCFH-DA探針?lè)z測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧，ELISA法檢測(cè)MDA和SOD含量，Western-blot法檢測(cè)p-S6K和p-AKT

5、的水平。
　　結(jié)果：相對(duì)于假手術(shù)組，CLP法處理動(dòng)物后，血清ALT、AST、和8-OHdG的水平明顯增高，肝臟組織 SOD、GSH-Px和CAT活性降低，而8- OHdG水平和MDA活性明顯升高；Real-Time PCR和/或Western-blot結(jié)果顯示，CLP術(shù)后大鼠肝臟組織mTOR的表達(dá)明顯升高，p-S6K和p-AKT水平增加，而S6K和AKT的表達(dá)不變。采用雷帕霉素處理顯著降低CLP術(shù)后血清ALT、AST和8-OHdG