逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑類藥物對雞逆轉(zhuǎn)錄病毒的抑制作用及藥物選擇壓下禽白血病病毒耐藥毒株的產(chǎn)生.pdf

1、禽白血病病毒（ALV）、禽網(wǎng)狀組織增生癥病毒(REV)與人的艾滋病病毒（HIV）同屬于反轉(zhuǎn)錄病毒，由于反轉(zhuǎn)錄病毒極易突變的特性，迄今為止，由此類病毒引起的疾病均沒有有效的疫苗，但是針對艾滋病，目前已經(jīng)研發(fā)出很多藥物能夠?qū)Σ《井a(chǎn)生抑制作用而使疾病得到一定的控制。本研究室在禽白血病病毒沒有有效疫苗和目前使用的很多弱毒疫苗都存在REV污染并無有效方法去除的現(xiàn)狀的基礎上，根據(jù)病毒具有相似性的原理，利用對艾滋病有抑制作用的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑類藥物，試

2、圖探索此類藥物在輔助禽白血病病毒凈化中的可行性和在去除疫苗毒種中REV污染的可操作性。
　　1、不同藥物及其組合對ALV和REV的體外抑制作用及其應用
　　首先通過在培養(yǎng)液中添加不同藥物濃度連續(xù)傳代以及利用CCK-8測定細胞活性的方法，確定了培養(yǎng)液中添加不超過5ug/ml的藥物濃度對于DF-1細胞的復制沒有影響。針對ALV的實驗證實，當在培養(yǎng)液中添加不同的藥物濃度時，藥物濃度與抗病毒作用呈現(xiàn)正相關性，即藥物濃度越高，對病毒復

3、制的抑制作用越高；在針對REV的證實，當在培養(yǎng)液中分別添加5ug/ml的AZT或LAM以及兩者聯(lián)合應用時均可以顯著抑制REV在DF-1細胞上的復制，通過在新城疫弱毒疫苗中人為添加REV模擬AZT或LAM以及兩者聯(lián)合應用對疫苗毒種中REV污染的凈化作用，結果顯示經(jīng)藥物干預4代后即將REV去除，并且凈化后毒種檢驗合格。本研究證實了AZT或LAM在體外對REV的抑制作用，并在人工模擬實驗中成功凈化了疫苗毒種中污染的REV。
　　2、在藥

4、物選擇壓下禽白血病病毒耐藥毒株的產(chǎn)生
　　經(jīng)細胞活性實驗和對病毒的抑制作用實驗選定3ug/ml的AZT藥物濃度作為藥物選擇壓傳代的最適濃度，在6孔細胞板中分別設置3個用藥組和3個不添加藥物組，在細胞上連傳50代后，將6個毒株進行定量，再以相同的病毒量接種細胞，分別在0ug/ml、1ug/ml、3ug/ml、5ug/ml的濃度下進行培養(yǎng)，通過測定各組的p27判斷出在3ug/ml藥物濃度下，連傳50代出現(xiàn)了耐藥毒株。
　　3、不

5、同藥物及其組合對ALV-J在海蘭褐雞體內(nèi)復制的抑制作用
　　通過給不同組別的雞分別注射不同劑量的AZT后通過每周稱重和檢測對NDV和AIV-H9的抗體評估不同劑量AZT對雞體重和免疫功能的影響，結果顯示與對照組相比，體重和抗體水平差異均不顯著。在人工攻毒ALV-J后，通過每周采集雞抗凝血檢測病毒血癥陽性率，結果表明與不使用藥物的對照組的持續(xù)病毒血癥相比，10mg藥物組的病毒血癥在前6周沒有出現(xiàn)，5mg藥物組病毒血癥在第7周時完全消