骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡鼠機(jī)制及療效評價.pdf

1、目的：研究間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)的輸注是否可以減輕系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)小鼠的自身免疫反應(yīng)，改善其免疫損傷，并探討MSC治療SLE機(jī)制。
　　 方法：⑴分離大鼠骨髓MSC：分離雄性SD大鼠(80g)股骨、脛骨，采用全骨髓培養(yǎng)法分離、擴(kuò)增、傳代、凍存、復(fù)蘇MSC，并描繪MSC生長曲線。⑵動物實驗分組：將雌性MRL/mp(fas)lpr小鼠隨機(jī)分為2組，每組5只，試驗組：在14周齡時尾靜脈輸注MSC(0.3×106/0.15ml.

2、只)；對照組：以生理鹽水代替MSC作尾靜脈輸注。⑶實驗持續(xù)8周，進(jìn)行下列指標(biāo)觀察：①每天觀察小鼠一般情況：進(jìn)食、精神、毛發(fā)、體重、存活時間直至處死。②每3天收集小鼠尿液，行bradrord法尿蛋白濃度測定。③每周剪尾采血50 ul，分離血清，放射免疫法測血清抗ds-DNA抗體濃度。④小鼠22周齡時切取腎臟作病理切片檢查，觀察狼瘡性腎炎腎癥病理改變，同時作免疫復(fù)合物免疫組織化學(xué)檢查。⑤流式細(xì)胞術(shù)測外周血、脾臟、胸腺CD4+CD25+T細(xì)胞

3、水平。
　　 結(jié)果：⑴采用全骨髓培養(yǎng)法，7-10天后細(xì)胞可鋪滿培養(yǎng)瓶底85-95％，傳至第2、3代后收集細(xì)胞，生長曲線示原代至3代的MSC生長狀態(tài)較好。⑵尾靜脈輸注后，小鼠局部、整體無不良反應(yīng)。3)在實驗觀察的8周時間內(nèi)：①2組小鼠均存活8周直至處死，進(jìn)食、精神狀態(tài)、活動度、體重、毛發(fā)大致相同。②實驗前兩組尿蛋白濃度無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；MSC輸注組，尿蛋白濃度顯著低于對照組(P＜0.05)；③MSC輸注組，血清抗ds-

4、DNA抗體濃度顯著低于對照組(P＜0.05)。④腎臟病理HE染色觀察：MSC輸注組小鼠間質(zhì)性腎炎病理改變較對照組小鼠減輕。腎臟病理免疫組化染色觀察：MSC輸注組小鼠的腎小球系膜區(qū)免疫復(fù)合物沉積量減少，范圍縮小呈點狀分布；對照組小鼠的腎小球系膜區(qū)免疫復(fù)合物沉積量較多，范圍較大呈片狀分布，兩組有顯著性差異(P＜0.05)。⑤試驗組外周血、胸腺中CD4+CD25+T細(xì)胞水平顯著高于對照組(P＜0.05)；試驗組脾臟CD4+CD25+T細(xì)胞略高