基于微小RNA表達(dá)機制探討消腫止痛膏對骨骼肌損傷后重塑和修復(fù)的影響.pdf

1、目的:基于微小RNA表達(dá)機制探討消腫止痛膏對骨骼肌損傷后重塑和修復(fù)的影響
　　方法:
　　第一部分:通過觀察不同載藥量消腫止痛軟膏對二甲苯所致的小鼠耳腫脹的消腫作用和對醋酸所致的小鼠疼痛反應(yīng)的影響，評價其消腫鎮(zhèn)痛作用，對能夠繼續(xù)規(guī)范化應(yīng)用有著重要的臨床價值、經(jīng)濟效益和社會意義。
　　第二部分:基于微小RNA表達(dá)機制探討消腫止痛膏對骨骼肌損傷后重塑和修復(fù)的作用機制。通過鈍挫傷模型的方法建立大鼠腓腸肌損傷模型，觀察消腫止痛

2、膏對大鼠損傷后1d、4d、7d外表形態(tài)學(xué)與組織形態(tài)學(xué)變化，結(jié)合損傷后4d、7d、14d、21d大鼠定量PCR檢測腓腸肌微小RNA-133、MEF2、MyoD mRNA的表達(dá)水平，探討消腫止痛膏對大鼠腓腸肌鈍挫傷模型的肌肉重塑與修復(fù)的作用機制。
　　第三部分:探討消腫止痛膏外敷結(jié)合彈性固定治療踝關(guān)節(jié)扭傷疼痛與腫脹的相關(guān)性;比較消腫止痛膏外敷結(jié)合彈性固定與單純“RICE”治療急性踝關(guān)節(jié)扭傷的臨床療效。觀察70例門急診患者以中藥外敷結(jié)合

3、彈力繃帶固定與單純使用“RICE”治療。采用疼痛視覺模擬評分（VAS評分）、“8”字法踝關(guān)節(jié)腫脹程度測量、Takakura踝關(guān)節(jié)評分與中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)作為評定標(biāo)準(zhǔn)。探討患者主觀感受的VAS評分和腫脹程度測量數(shù)據(jù)之間具有相關(guān)性，Takakura踝關(guān)節(jié)評分差異及療效評價。
　　結(jié)果:
　　第一部分:①測定不同載藥量消腫止痛軟膏的消腫作用時，七厘散組、消腫止痛軟膏中劑量組、消腫止痛軟膏低劑量組腫脹度均小于模型組(P＜0.05)

4、，各組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義;②測定不同載藥量消腫止痛軟膏的鎮(zhèn)痛作用時，七厘散組、消腫止痛軟膏中劑量組的扭體次數(shù)均小于模型組(P＜0.05)。
　　第二部分:從組織病理切片觀察，模型組與治療組損傷后1天、4天、7天等各個時間點組織形態(tài)學(xué)損傷評分均明顯高于空白組(P＜0.01)。治療組在損傷后7天組織形態(tài)損傷評分明顯低于模型組(P＜0.05)。
　　治療組MEF2的表達(dá)水平顯著高于空白組與模型組，這進(jìn)一步證實了MEF2在外用

5、藥物中引起骨骼肌重塑及修復(fù)過程中的重要作用。MEF2在損傷后7天上升，其后表達(dá)一直維持在較高水平，至損傷后21天仍可以表達(dá)出較高水平。與模型組相比較，其表達(dá)的高峰期在14天左右，其后則基本回歸到一般狀態(tài)。MoyD雖然也參與了成肌細(xì)胞的分化及增殖等多個過程，其表達(dá)水平與模型組相比并無明顯改變。
　　在微小RNA表達(dá)方面，損傷后4天，空白組、模型組、治療組無明顯差異，隨著時間延長，模型組與治療組均有所上升，且治療組上升幅度大于模型組，

6、到達(dá)21天，模型組表達(dá)水平已經(jīng)下降，趨于回歸，而治療組水平依然有上升趨勢。
　　第三部分:治療前、后2組間VAS評分?jǐn)?shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義;治療中2組間VAS評分?jǐn)?shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。說明治療前2組患者疼痛無差異，具有可比性;治療過程中，治療組VAS緩解情況較對照組快。
　　2組治療中、后腫脹程度數(shù)據(jù)均低于治療前，說明2組患者腫脹程度均有減輕。治療前腫脹程度無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，說明兩組間有可比性。治療中、后，兩組間有統(tǒng)計學(xué)差異，

7、治療組較對照組腫脹程度緩解更加明顯。
　　患者VAS評分和腫脹程度之間有相關(guān)性(P＜0.01);以VAS評分作為因變量，腫脹程度數(shù)據(jù)作為自變量，兩者間線性回歸方程為:Y(VAS)=0.256X（腫脹程度）-4.200，可見兩者之間呈正相關(guān)，隨著VAS的升高，腫脹程度有升高的趨勢。確定系數(shù)R2=0.407，表示因變量VAS評分變異中有40.7％可由自變量數(shù)據(jù)變化來解釋。
　　消腫止痛膏外敷結(jié)合彈性固定治療急性踝關(guān)節(jié)扭傷，療效明

8、顯優(yōu)于單純“RICE”治療。
　　結(jié)論:
　　第一部分:①消腫止痛膏應(yīng)用方便，藥效持久，便于收藏攜帶。
　　②消腫止痛膏高劑量組膏體過于干硬，涂抹時與皮膚的貼附性很差，影響藥物有效成分吸收，影響療效。
　　③消腫止痛軟膏對局部和全身都有良好的消腫鎮(zhèn)痛作用。
　　第二部分:①本實驗采用的造模方法穩(wěn)定、簡單實用，各組動物損傷程度相當(dāng)，造模后7-21天為骨骼肌損傷的修復(fù)期。
　　②大鼠腓腸肌損傷后，在自然修

9、復(fù)過程中，生肌調(diào)節(jié)因子與miRNA-133的表達(dá)水平呈現(xiàn)上升-回落的趨勢，其中損傷后7-14天，為其表達(dá)的高峰期。在治療組，MEF2與miRNA的表達(dá)水平呈現(xiàn)上升趨勢，即使至損傷后21天，其表達(dá)仍未見明顯下降趨勢，可見消腫止痛軟膏可以促進(jìn)MEF2與miRNA的表達(dá)。
　?、跰oyD雖然也參與了成肌細(xì)胞的分化及增殖等多個過程，但其表達(dá)水平與模型組相比并無明顯差異，MoyD可能與外用藥物導(dǎo)致的骨骼肌再生修復(fù)無關(guān)。
　?、芟[止痛

10、軟膏可以促進(jìn)MEF2與miRNA的表達(dá)，MEF2與miRNA可以調(diào)節(jié)骨骼肌的再生修復(fù)，因此，消腫止痛膏可以通過基因調(diào)控，發(fā)揮對骨骼肌損傷后的再生修復(fù)作用。
　　第三部分:①消腫止痛膏可以改善患者治療過程中的疼痛情況，雖然在治療后都可以達(dá)到同一水平，但在治療過程中，治療組優(yōu)于對照組。
　　②消腫止痛膏可以改善踝關(guān)節(jié)扭傷患者的腫脹程度、踝關(guān)節(jié)功能，其療效明顯優(yōu)于單純RICE療法。
　?、巯[止痛膏治療前、后，患者疼痛與腫脹