SDF-1-CXCR4軸參與骨髓間充質(zhì)干細胞修復(fù)大鼠急性心肌梗死的實驗研究.pdf

1、本研究分為五部分：
　　 實驗一：BMSC的體外培養(yǎng)和CXCR4的表達
　　 目的：探討成年大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)在體外分離、培養(yǎng)的方法；觀察BMSC的生物學(xué)特性；第2、3、4、5 代BMSC的SDF-1 受體CXCR4基因的表達。
　　 方法：提取成年大鼠骨髓，全骨髓培養(yǎng)法通過多次傳代獲取純化的BMSC。通過相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)變化，免疫組化檢測第2、3、4、5 代BMSC的CD34、CD44、C

2、XCR4的表達。RT-PCR檢測第2、3、4、5 代BMSC的CXCR4的表達變化。
　　 結(jié)果：全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)的BMSC細胞增殖能力強、細胞均一性較好。免疫組化檢測顯示BMSC 高表達CD44，基本不表達CD34，CXCR4 有較強表達，RT-PCR 示BMSC的CXCR4 mRNA表達呈陽性，各代BMSC的CXCR4的表達無明顯變化。
　　 結(jié)論：全骨髓培養(yǎng)法是一種簡便易行、有效分離BMSC的方法。BMSC表達CX

3、CR4。
　　 實驗二：大鼠急性心肌梗死模型的構(gòu)建
　　 目的：探討成功制備大鼠心肌梗死模型的方法。
　　 方法：結(jié)扎SD大鼠左前降支制作急性心肌梗死模型，分析80只大鼠術(shù)中術(shù)后并發(fā)癥的成因和防治方法,并經(jīng)心電圖、組織學(xué)和超聲心動圖等檢查確認模型成功建立。
　　 結(jié)果：急性心肌梗死大鼠術(shù)后早期心電圖出現(xiàn)ST段抬高、室壁發(fā)白；晚期心電圖出現(xiàn)病理性Q波，室壁瘢痕形成，心功能明顯下降。手術(shù)中的主要并發(fā)癥和死因有

4、心律失常、出血、呼吸道阻塞和肺損傷等。手術(shù)后的主要并發(fā)癥和死因有感染、肺不張、心心衰等。
　　 結(jié)論：本實驗通過減少肺損傷、心律失常的發(fā)生，及采取抗感染等措施成功建立SD大鼠心肌梗死模型。
　　 實驗三：SDF-1/CXCR4軸介導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌梗死組織遷移的體外實驗研究
　　 目的：研究基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）/CXCR4 軸在骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）遷移到梗死心肌中的作用。
　

5、　 方法：全骨髓貼壁法培養(yǎng)BMSC，結(jié)扎SD大鼠左前降支制作急性心肌梗死模型并制備正常和梗死心肌組織提取液，利用Boyden 小室體外遷移體系觀察不同濃度SDF-1和心肌組織提取液對BMSC的趨化作用；心肌梗死后不同時期的梗死組織提取液對BMSC的體外趨化作用的差異；AMD3100 處理BMSC對心肌組織提取液趨化BMSC的影響。
　　 結(jié)果：SDF-1對BMSC 有劑量依賴性的趨化作用；梗死后24h 至1w的心肌組織提取液對

6、BMSC 有明顯的趨化作用，72h 至1w作用最明顯，而這種作用可部分被SDF-1 受體CXCR4的阻斷劑AMD3100 抑制。
　　 結(jié)論：梗死心肌組織提取液對BMSC 有明顯的趨化作用，SDF-1/CXCR4可能是梗死心肌組織提取液中趨化BMSC的主要趨化因子/受體對。
　　 實驗四：SDF-1/CXCR4軸對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖和凋亡的影響
　　 目的：探討SDF-1對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）增

7、殖的影響；SDF-1 預(yù)處理對大鼠BMSC 在無氧無血清條件下凋亡的影響。
　　 方法：本實驗采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)BMSC。不同劑量SDF-1(1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL）與BMSC 共培養(yǎng)48h，MTT法分析BMSC增殖的增殖情況。將細胞分別與10ng/mL、100ng/mL SDF-1作用24h后在無氧無血清條件下培養(yǎng)6h，流式細胞儀和TUNEL法檢測細胞凋亡變化。
　　 結(jié)果：MTT結(jié)果表明，S

8、DF-1 呈劑量依賴性促進BMSC增殖，以100ng/mL SDF-1 促BMSC增殖作用最明顯。在無氧無血清條件下，SDF-1 預(yù)處理組細胞的凋亡率與對照組的凋亡率相比降低（P<0. 05)，100ng/mL SDF-1 預(yù)處理組凋亡率最低。
　　 結(jié)論：SDF-1 呈劑量依賴性促進BMSC增殖。SDF-1 預(yù)處理BMSC 能抑制其無氧無血清條件下的凋亡。
　　 實驗五：SDF-1預(yù)處理用于大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療

9、急性心肌梗死的研究
　　 目的：探討基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）預(yù)處理的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）移植對大鼠急性心肌梗死（AMI）的治療效果。
　　 方法：全骨髓貼壁法培養(yǎng)BMSC；將BMSC與100ng/mL SDF-1作用24h。建立大鼠AMI模型，將經(jīng)100ng/mL SDF-1 預(yù)處理的BMSC和未經(jīng)處理的BMSC 植入大鼠梗死心肌周邊，2W后超聲觀察心臟功能的變化。
　　 結(jié)果：SDF-1