二十二碳六烯酸對(duì)大鼠心房顫動(dòng)模型心房電重構(gòu)與心房纖維化的影響.pdf

1、目的：
　　探討二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid，DHA）對(duì) SD大鼠心房顫動(dòng)（atrial fibrillation，AF）模型心房電重構(gòu)與心房纖維化的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　1.大鼠房顫模型的制備與分組 Sprague-Dawley（SD）大鼠（250~300g）適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，篩選出對(duì)乙酰膽堿（66μg/mL）-氯化鈣（50mg/mL）混合液（0.1mL/100g）敏感的大鼠8

2、0只。將80只乙酰膽堿-氯化鈣混合液敏感的大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（CTL組）、對(duì)照DHA處理組（DHA組）、房顫組（AF組）和房顫DHA處理組（DHA+AF組），每組20只。CTL組和DHA組尾靜脈注射生理鹽水，AF組和DHA+AF組尾靜脈注射乙酰膽堿（66μg/mL）-氯化鈣（50mg/mL）混合液，給藥劑量均為0.1mL/100g，每天給藥1次，記錄心電圖，連續(xù)3天，建立大鼠房顫模型。從實(shí)驗(yàn)第4天開(kāi)始，CTL組給予生理鹽水，DHA組給予

3、DHA溶液（10mg/mL）和生理鹽水，AF組給予生理鹽水和乙酰膽堿（66μg/mL）-氯化鈣（50mg/mL）混合液，DHA+AF組給予DHA溶液（10mg/mL）和乙酰膽堿（66μg/mL）-氯化鈣（50mg/mL）混合液，給藥方式均為尾靜脈注射，給藥劑量均為0.1mL/100g，每天給藥1次，連續(xù)14天，實(shí)驗(yàn)第4、10、17天記錄心電圖。
　　2.分析實(shí)驗(yàn)第3、4、10、17天心電圖，觀察DHA對(duì)乙酰膽堿-氯化鈣混合液誘發(fā)的

4、房顫大鼠房顫持續(xù)時(shí)間的影響。
　　3.連續(xù)雙刺激法測(cè)定大鼠心房有效不應(yīng)期（effective refractory period，ERP），全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄大鼠心房肌細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程（action potential duration， APD）和雙孔鉀通道TASK-1（TWIK-related acid-sensitive K+channels-1）電流，觀察DHA對(duì)房顫大鼠心房電重構(gòu)的影響。
　　4.實(shí)時(shí)熒光定量PC

5、R法檢測(cè)大鼠心房組織TASK-1 mRNA的表達(dá)，Western blot法檢測(cè)大鼠心房組織TASK-1蛋白的表達(dá)，觀察DHA對(duì)TASK-1 mRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　5. Masson染色法觀察大鼠心房組織膠原纖維增生情況，觀察DHA對(duì)房顫大鼠心房纖維化的影響。
　　6. Western blot法檢測(cè)大鼠心房組織細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase1/

6、2， ERK1/2）、磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase1/2，p-ERK1/2）和Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)大鼠心房組織Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)，觀察DHA對(duì)ERK1/2、p-ERK1/2蛋白以及Ⅰ型膠原mRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1. DHA對(duì)大鼠房顫持續(xù)時(shí)間的影響
　　分析實(shí)驗(yàn)第3

7、、4、10、17天心電圖，結(jié)果顯示，大鼠尾靜脈注射乙酰膽堿-氯化鈣混合液后房顫持續(xù)時(shí)間隨實(shí)驗(yàn)天數(shù)增加而逐漸延長(zhǎng)，而DHA可以縮短房顫持續(xù)時(shí)間。
　　2. DHA對(duì)大鼠心房ERP和心房肌細(xì)胞APD的影響
　　與CTL組相比，AF組大鼠心房ERP明顯縮短（從79.5±5.8 ms到57.2±6.1 ms， P<0.05），DHA組和DHA+AF組明顯延長(zhǎng)（前者從79.5±5.8 ms到99.5±8.6 ms， P<0.05；后者

8、從79.5±5.8 ms到90.2±7.4 ms，P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房ERP明顯延長(zhǎng)（P<0.05）。
　　與CTL組相比，AF組大鼠心房肌細(xì)胞復(fù)極50％時(shí)的動(dòng)作電位時(shí)程（action potential duration at50% repolarization，APD50）和復(fù)極90%時(shí)的動(dòng)作電位時(shí)程（action potential duration at90%repolarization，A

9、PD90）明顯縮短（P<0.05）， DHA組和DHA+AF組明顯延長(zhǎng)（P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房肌細(xì)胞APD50和APD90明顯延長(zhǎng)（P<0.05）。
　　3. DHA對(duì)大鼠心房肌細(xì)胞TASK-1電流及mRNA和蛋白表達(dá)的影響
　　與CTL組相比，AF組和DHA+AF組大鼠心房肌細(xì)胞TASK-1電流密度明顯升高（+30 mV時(shí)，前者從1.65±0.14 pA/pF到2.36±0.17 pA/pF，

10、P<0.05；+30 mV時(shí)，后者從1.65±0.14 pA/pF到1.90±0.12 pA/pF，P<0.05），DHA組明顯降低（+30 mV時(shí)，從1.65±0.14 pA/pF到1.26±0.11 pA/pF，P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房肌細(xì)胞TASK-1電流密度明顯降低（P<0.05）。
　　與CTL組相比，AF組和DHA+AF組大鼠心房組織TASK-1 mRNA表達(dá)水平明顯升高（P<0.05），D

11、HA組明顯降低（P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房組織TASK-1 mRNA表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）。
　　與CTL組相比，AF組和DHA+AF組大鼠心房組織TASK-1蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05），DHA組明顯降低（P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房組織TASK-1蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）。
　　4. DHA對(duì)大鼠心房纖維化的影響
　　Masson染色結(jié)

12、果顯示，CTL組與 DHA組大鼠心房肌間質(zhì)可見(jiàn)正常量的膠原纖維；AF組大鼠心房肌間質(zhì)可見(jiàn)大量膠原纖維增生，心房纖維化程度高；DHA+AF組大鼠心房肌間質(zhì)可見(jiàn)少量膠原纖維增生，心房纖維化程度較AF組降低。
　　5. DHA對(duì)大鼠心房組織ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表達(dá)的影響
　　各組 ERK1/2蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化，而 p-ERK1/2蛋白表達(dá)發(fā)生變化， p-ERK1/2蛋白與ERK1/2蛋白比值發(fā)生變化。與CTL組相比

13、，AF組大鼠心房組織p-ERK1/2/ERK1/2蛋白比值明顯升高（P<0.05），DHA組明顯降低（P<0.05）， DHA+AF組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房組織p-ERK1/2/ERK1/2蛋白比值明顯降低（P<0.05）。
　　6. DHA對(duì)大鼠心房組織Ⅰ型膠原 mRNA和蛋白表達(dá)的影響
　　與CTL組相比，AF組和DHA+AF組大鼠心房組織Ⅰ型膠原 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升

14、高（P<0.05），DHA組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。與AF組相比， DHA+AF組大鼠心房組織Ⅰ型膠原 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. DHA具有延長(zhǎng)SD大鼠房顫模型心房肌細(xì)胞APD和心房ERP、改善心房電重構(gòu)的作用，此作用與其下調(diào)心房肌TASK-1 mRNA和蛋白的表達(dá)進(jìn)而降低心房肌細(xì)胞TASK-1電流密度有關(guān)。
　　2. DHA具有改善SD大鼠房顫模型心房纖維化的作用，