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文檔簡介
1、目的:本研究探討硫化氫(H2S)是否通過抗炎、抗纖維化作用,改善腹膜透析大鼠腹膜纖維化及腹膜轉(zhuǎn)運功能。
方法:
1.體內(nèi)研究:20只雄性SD大鼠隨機分為4組:對照組:0.9%生理鹽水20 ml/d腹腔注射;硫化氫(H2S)組:NaHS1μmol/kg*d加入0.9%生理鹽水中腹腔注射;建模組:4.25%高糖腹透液(PDFs)20 ml/d腹腔注射,第1,3,5,7天加入脂多糖(LPS)0.6 mg/kg腹腔注射;治療
2、組:高糖組造模同時予NaHS1μmol/kg*d腹腔注射。28天后行腹膜平衡試驗(PET),計算超濾量、D2h葡萄糖/D0h葡萄糖,評估腹膜轉(zhuǎn)運功能。取壁層腹膜組織行 HE染色、Masson染色等病理染色觀察腹膜和膠原纖維厚度;免疫組化檢測單核/巨噬細胞標志蛋白(ED-1)、單核巨噬細胞趨化蛋白(MCP-1)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)、肌纖維蛋白(α-SMA)、纖維黏連蛋白(FN)、膠原蛋白-Ⅲ(Col-Ⅲ)和血小板-內(nèi)皮細胞粘附因
3、子(CD31)等炎癥纖維化、新生血管形成指標的表達。
2.體外研究:取正常SD大鼠,分離培養(yǎng)大鼠原代腹膜間皮細胞,取第二代至第四代細胞用于實驗研究。將細胞同步化處理后隨機分為5組:對照組:細胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液中;H2S組:細胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液中,同時予NaHS300μM;建模組:正常培養(yǎng)液:2.5% PDF(V/V)=1:1; H2S低劑量治療組:正常培養(yǎng)液:2.5% PDF(V/V)=1:1,同時予NaHS100μM;H2S
4、高劑量治療組:正常培養(yǎng)液:2.5% PDF(V/V)=1:1,同時予NaHS300μM。24小時后提取細胞總RNA、蛋白,RT-PCR檢測各組MCP-1、ICAM-1、IL-6炎癥因子mRNA的表達;Western-blot檢測各組α-SMA、FN等相關纖維化蛋白的表達。
結(jié)果:
1.體內(nèi)研究:與對照組相比,建模組超濾量明顯減少,D2h葡萄糖/D0h葡萄糖比值明顯降低(P<0.05),而治療組、H2S組上述變化不明顯
5、;HE染色示建模組腹膜結(jié)構(gòu)紊亂,腹膜厚度、腹膜間皮下炎癥細胞浸潤及膠原沉積較對照組顯著增加(P<0.05),予 NaSH治療后,腹膜厚度、炎癥細胞浸潤、膠原沉積等明顯減少(P<0.05);免疫組化示,與對照組相比建模組 ED1、MCP-1、TGF-β1、α-SMA、FN、Col-Ⅲ及 CD31等蛋白的表達量顯著增加(均 P<0.05);然而,與建模組相比,治療組 ED1、MCP-1、TGF-β1、α-SMA、FN、Col-Ⅲ及 CD31
6、的表達量顯著降低(均P<0.05)。
2.體外研究:與對照組相比,建模組腹膜間皮細胞 MCP-1、ICAM-1、IL-6等炎癥因子的表達明顯增多,α-SMA、FN等蛋白的表達明顯上調(diào),予 NaHS干預后上述炎癥、纖維化因子的表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義。
結(jié)論:
1.高糖腹透液可誘導腹膜纖維化。
2.外源性H2S對高糖腹透液引起的腹膜纖維化有防治作用。
3. H2S改善腹膜透析大鼠腹膜
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