硫化氫對(duì)腹膜透析大鼠并發(fā)腹膜纖維化的防治作用.pdf

1、目的：本研究探討硫化氫（H2S）是否通過(guò)抗炎、抗纖維化作用，改善腹膜透析大鼠腹膜纖維化及腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能。
　　方法：
　　1.體內(nèi)研究：20只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組：對(duì)照組：0.9％生理鹽水20 ml/d腹腔注射；硫化氫（H2S）組：NaHS1μmol/kg*d加入0.9%生理鹽水中腹腔注射；建模組：4.25%高糖腹透液(PDFs)20 ml/d腹腔注射，第1,3,5,7天加入脂多糖（LPS）0.6 mg/kg腹腔注射；治療

2、組：高糖組造模同時(shí)予NaHS1μmol/kg*d腹腔注射。28天后行腹膜平衡試驗(yàn)(PET)，計(jì)算超濾量、D2h葡萄糖/D0h葡萄糖，評(píng)估腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能。取壁層腹膜組織行 HE染色、Masson染色等病理染色觀(guān)察腹膜和膠原纖維厚度；免疫組化檢測(cè)單核/巨噬細(xì)胞標(biāo)志蛋白（ED-1）、單核巨噬細(xì)胞趨化蛋白（MCP-1）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β1）、肌纖維蛋白（α-SMA）、纖維黏連蛋白（FN）、膠原蛋白-Ⅲ（Col-Ⅲ）和血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附因

3、子（CD31）等炎癥纖維化、新生血管形成指標(biāo)的表達(dá)。
　　2.體外研究：取正常SD大鼠，分離培養(yǎng)大鼠原代腹膜間皮細(xì)胞，取第二代至第四代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究。將細(xì)胞同步化處理后隨機(jī)分為5組：對(duì)照組：細(xì)胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液中；H2S組：細(xì)胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液中，同時(shí)予NaHS300μM；建模組：正常培養(yǎng)液:2.5% PDF(V/V)=1:1； H2S低劑量治療組：正常培養(yǎng)液:2.5% PDF(V/V)=1:1，同時(shí)予NaHS100μM；H2S

4、高劑量治療組：正常培養(yǎng)液:2.5% PDF(V/V)=1:1，同時(shí)予NaHS300μM。24小時(shí)后提取細(xì)胞總RNA、蛋白，RT-PCR檢測(cè)各組MCP-1、ICAM-1、IL-6炎癥因子mRNA的表達(dá)；Western-blot檢測(cè)各組α-SMA、FN等相關(guān)纖維化蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.體內(nèi)研究：與對(duì)照組相比，建模組超濾量明顯減少，D2h葡萄糖/D0h葡萄糖比值明顯降低（P<0.05），而治療組、H2S組上述變化不明顯

5、；HE染色示建模組腹膜結(jié)構(gòu)紊亂，腹膜厚度、腹膜間皮下炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及膠原沉積較對(duì)照組顯著增加（P<0.05），予 NaSH治療后，腹膜厚度、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、膠原沉積等明顯減少（P<0.05）；免疫組化示，與對(duì)照組相比建模組 ED1、MCP-1、TGF-β1、α-SMA、FN、Col-Ⅲ及 CD31等蛋白的表達(dá)量顯著增加（均 P<0.05）；然而，與建模組相比，治療組 ED1、MCP-1、TGF-β1、α-SMA、FN、Col-Ⅲ及 CD31

6、的表達(dá)量顯著降低（均P<0.05）。
　　2.體外研究：與對(duì)照組相比，建模組腹膜間皮細(xì)胞 MCP-1、ICAM-1、IL-6等炎癥因子的表達(dá)明顯增多，α-SMA、FN等蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)，予 NaHS干預(yù)后上述炎癥、纖維化因子的表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.高糖腹透液可誘導(dǎo)腹膜纖維化。
　　2.外源性H2S對(duì)高糖腹透液引起的腹膜纖維化有防治作用。
　　3. H2S改善腹膜透析大鼠腹膜