IGFBP7（rP1）對肝星狀細(xì)胞活化及核因子-κB活性影響的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：明確胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(IGFBP7(rP1))是否具有活化肝星狀細(xì)胞及增加細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成與分泌的作用。 方法：選擇體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞株(HSC-T6)作為研究對象，分別設(shè)立IGFBP7(rP1)10μg/L、20μg/L、30μg/L處理組和空白對照組(加入等量磷酸鹽緩沖溶液(PBS))，干預(yù)因素處理24小時(shí)后收集細(xì)胞爬片或抽提細(xì)胞胞漿蛋白，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察HSC中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(

2、α-SMA)、I型膠原(Collagen I)、纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)的表達(dá)變化，并通過Image-Pro圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析；Western Blot檢測Collagen I在HSC中的表達(dá)水平，并通過Bandscan 5.0圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析；同時(shí)，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中FN的含量。 結(jié)果：(1)免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示：各組細(xì)胞胞漿內(nèi)均可見棕黃色或

3、棕褐色顆粒沉積，α-SMA、Collagen I、FN呈陽性表達(dá)。經(jīng)圖像分析顯示，IGFBP7(rP1)10μg/L組(α-SMA11.57±0.50、Collagen I 9.74±0.34、FN 10.54±0.67)、20μg/L組(α-SMA 11.84±0.50、Collagen I 10.69±0.65、FN 13.99±0.72)、30gμ/L組(α-SMA 12.90±0.37、Collagen I 11.15±0.41

4、、FN 13.32±0.70)α-SMA、Collagen I與FN的表達(dá)均較空白對照組(α-SMA 7.67士0.41、Collagen I 6.82士0.47、FN 4.34±0.46)顯著增強(qiáng)(P＜0.05)，且在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴關(guān)系。其中α-SMA和Collagen I在IGFBP7(rP1)30μg/L幾組表達(dá)最強(qiáng)，F(xiàn)N在IGFBP7(rP1)20μg/L組表達(dá)最強(qiáng)。(2)Western Blot分析結(jié)果顯示：95kD、4

5、3kD處分別為Collagen I與內(nèi)參照(β-actin)的位置，IGFBP7(rP1)處理組可見明顯的蛋白條帶表達(dá)，而空白對照組Collagen I的條帶較弱，經(jīng)內(nèi)參照(β-actin)校正后顯示，IGFBP7(rP1)10μg/L組(0.7663±0.0412)、20μg/L組(0.7439±0.0720)Collagen I的表達(dá)水平較空白對照組(0.6402±0.0475)增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)ELI

6、SA檢測結(jié)果顯示：FN在空白對照組已有一定量的分泌，但I(xiàn)GFBP7(rP1)10.μg/L組(3.92±0.33)、20.μg/L組(5.16士0.49)、30μg/L組(4.99±0.50)FN的含量仍較空白對照組(3.40±0.19)增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：(1)IGFBP7(rP1)可以激活體外培養(yǎng)的HSC，且在一定劑量范圍內(nèi)隨著IGFBP7(rP1)劑量的增加HSC活化的程度逐漸增強(qiáng)。(2)IG