腫瘤壞死因子-α基因多態(tài)性與特發(fā)性肺纖維化相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：特發(fā)性肺纖維化（IPF）是指原因不明并以普通型間質(zhì)性肺炎(UIP)為特征性病理改變的一種慢性炎癥性間質(zhì)性肺疾病。其確切病因不明，目前認(rèn)為該病是一種患者在遺傳學(xué)或其他方面易感并對(duì)某種特殊侵害發(fā)生反應(yīng)的疾病。TNF-α是由活化的單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種活性多肽，認(rèn)為其在肺纖維化的發(fā)病過(guò)程中起著重要作用。近年來(lái)研究顯示TNF-α具有多態(tài)性，并且TNF基因多態(tài)性與肺炎、慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺癌等呼吸系統(tǒng)疾病遺傳易感性之間關(guān)系的文獻(xiàn)已有

2、大量報(bào)道。但TNF-α基因多態(tài)性與特發(fā)性肺纖維化相關(guān)性的研究，國(guó)內(nèi)外報(bào)道結(jié)果不完全一致。本試驗(yàn)旨在通過(guò)研究特發(fā)性肺纖維化患者TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)308位點(diǎn)G/A多態(tài)性與中國(guó)河北地區(qū)漢族特發(fā)性肺纖維化的相關(guān)性，探討中國(guó)河北地區(qū)漢族特發(fā)性肺纖維化患者的遺傳易感因素、發(fā)病機(jī)制，并觀察特發(fā)性肺纖維化患者血清TNF-α濃度變化，探討其在IPF發(fā)病中的作用及可能機(jī)制。
　　 方法：采用基于人群的病例-對(duì)照研究方法，參照2002年中華醫(yī)

3、學(xué)會(huì)呼吸分會(huì)頒布的《特發(fā)性肺（間質(zhì)）纖維化診斷和治療指南（草案）》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取臨床上確診的特發(fā)性肺纖維化(IPF)的河北地區(qū)漢族患者，共計(jì)84例，其中男性51例，女性33例，年齡43歲～88歲，平均年齡（66.7±9.5）歲，且除外繼發(fā)性肺纖維化、急性感染、腫瘤、栓塞、心衰、控制不良的糖尿病、消化性潰瘍、嚴(yán)重骨質(zhì)疏松、結(jié)核病及雖然診斷為IPF，但已經(jīng)接受激素或免疫抑制劑治療的患者。對(duì)照組：選擇漢族健康體檢者，共計(jì)80例，其中男性4

4、2例，女性38例，年齡40歲～73歲，平均年齡（50.3±7.8）歲。且既往無(wú)變態(tài)反應(yīng)性疾病病史，近期無(wú)感染，無(wú)免疫抑制劑應(yīng)用史。采集IPF患者及健康對(duì)照者外周靜脈5ml，以蛋白酶K消化-苯酚-氯仿有機(jī)溶劑法和樹脂型TM基因組DNA提純?cè)噭┖刑崛⊥庵苎准?xì)胞DNA，聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)法分析檢測(cè)IPF患者及健康對(duì)照者TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)308位點(diǎn)基因組多態(tài)性；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)IPF患者及健

5、康對(duì)照組血清中TNF-α的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、TNF-α-308位點(diǎn)基因多態(tài)性分析
　　 1.1 TNF-α-308的基因型本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)得到三種基因型：G/G型、G/A型及A/A型；其中G/G型為野生型，G/A型及A/A型為突變型。健康對(duì)照組與IPF組均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡性檢驗(yàn)，具有良好的可比性。
　　 1.2 TNF-α-308G/A多態(tài)性在兩組間的分布情況健康對(duì)照組

6、80例中檢測(cè)出G/G基因型67例，占83.8％，G/A基因型12例，占15.0％，A/A基因型1例，占1.2％。IPF組84例中檢測(cè)出G/G基因型57例，占67.9％，G/A基因型22例，占26.2％，A/A基因型5例，占5.9％。TNF-α-308的基因多態(tài)性在兩組間的分布頻率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且G/A及A/A基因型攜帶者相對(duì)于G/G基因型攜帶者患IPF的比值比(OR值)為2.441(95％CI1.153～5.168)。
　　

7、 1.3 TNF-α-308的各等位基因頻率在兩組間的分布情況健康對(duì)照組80例中G等位基因頻率為91.3％，A等位基因頻率為8.7％，IPF組84例中G等位基因頻率為81.0％，A等位基因頻率為19.0％。TNF-α-308的各等位基因頻率在兩紐間的分布頻率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且A等位基因攜帶者相對(duì)于G等位基因攜帶者患IPF的比值比（OR值）為2.454(95％CI1.256～4.796)。
　　 2、血清TNF-α蛋白濃度分析<

8、br>　　 IPF組與健康對(duì)照組血清TNF-α蛋白濃度分別為10.92±2.80ng/L、4.95±2.11ng/L，IPF組血清TNF-α蛋白濃度高于健康對(duì)照組，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1、結(jié)合本研究推測(cè)TNF-α-308位點(diǎn)的G/A基因多態(tài)性與中國(guó)河北地區(qū)漢族人群特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的易感性相關(guān)，IPF患者具有更高的A等位基因頻率，G/A及A/A基因型的攜帶者發(fā)生IPF的風(fēng)險(xiǎn)較G/G基因型攜帶者