Ezrin及WT1在原發(fā)性膜性腎病腎小球的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：原發(fā)性膜性腎病(IMN)作為一種慢性腎炎的常見病理類型，其病情存在逐漸惡化和自發(fā)緩解兩種不同預(yù)后。IMN藥物治療時間長、敏感性不一，副作用多，因此有關(guān)IMN發(fā)病機(jī)理及影響預(yù)后因素的研究一直受到人們的重視。大量的臨床和實驗研究表明，IMN作為免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎小球腎炎，其臟層上皮細(xì)胞即足細(xì)胞下免疫復(fù)合物沉積導(dǎo)致了足細(xì)胞和足細(xì)胞相關(guān)蛋白的改變。 埃茲蛋白(ezrin)是近年來被認(rèn)識的一種足細(xì)胞蛋白，屬于細(xì)胞膜細(xì)胞骨架連接蛋白(

2、ERM)家族，它與肌動蛋白(actin)細(xì)胞骨架和特定部位的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)相連，參與維持細(xì)胞的形態(tài)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和生長控制等。在腎臟疾病的實驗?zāi)Ｐ椭?，ezrin被認(rèn)為是一種有活性或死亡的足細(xì)胞標(biāo)記。有文獻(xiàn)報道，在不同致病機(jī)制引起的足細(xì)胞損傷中，ezrin免疫的表達(dá)有著明顯的差異。 Wilm腫瘤蛋白1(WT1)作為一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，腎臟形成后，其表達(dá)則僅限于足細(xì)胞中，對維持正常的足細(xì)胞功能起著非常重要的作用。已有研究顯示，WT1表達(dá)水平下

3、降可導(dǎo)致新月體腎炎或系膜硬化，另外WT1可轉(zhuǎn)錄活化足細(xì)胞裂孔膜蛋白nephrin。 本文研究的目的是通過免疫組化的方法檢測ezrin、WT1在IMN患者腎小球中表達(dá)水平的變化，并與臨床常用實驗指標(biāo)(如24小時尿蛋白定量、血肌酐)進(jìn)行相關(guān)性研究，探討ezrin、WT1是否可以作為判斷IMN嚴(yán)重程度的免疫組化指標(biāo)，并進(jìn)一步分析ezrin、WT1免疫組化表達(dá)與腎臟損害的關(guān)系，從而為IMN發(fā)病的研究提供更多的視角，為臨床診治、預(yù)后判斷提

4、供新的思路和方法。方法：(1)IMN組病例來源于2005年12月至2006年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腎內(nèi)科病房住院診治并經(jīng)臨床和病理確診的25例：IMN忠者，依據(jù)其病理分期進(jìn)一步分為I期IMN組(13例)、II期IMN組(8例)、III+Ⅳ期IMN組(4例)三組。(2)對照組病例來源于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科6例因腎臟腫瘤切除一側(cè)腫瘤腎后經(jīng)病理證實為腎臟良性腫瘤的患者。(3)IMN各組及對照組均在腎活檢或腎切除前留取尿液、血清標(biāo)

5、本。(4)采用免疫組織化學(xué)方法分別檢測I期IMN組、II期IMN’組、III+Ⅳ期IMN組患者與對照組患者腎小球ezrin及WT1的表達(dá)指數(shù)(EI)并分別進(jìn)行組間比較，(5)測定各組24小時尿蛋白定量、血肌酐的水平，且分別與ezrin及WT1的EI水平進(jìn)行相關(guān)性分析。(6)臨床指標(biāo)及實驗數(shù)據(jù)以x士s表示，ezrin、WT1在對照組、I期IMN組、II期IMN組及III+Ⅳ期IMN組表達(dá)的關(guān)系組間采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用SNK

6、法分析。ezrin、WTl與24h尿蛋白定量、血肌酐間采用直線相關(guān)分析。(7)采用SPSS 10.0軟件處理數(shù)據(jù)，以尸＜0.05代表有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1 臨床實驗指標(biāo)：IMN組患者平均年齡(42.52±12.71)與對照組患者平均年齡(41±13.78)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；對照組患者的的24小時尿蛋白定量、血肌酐分別為：(0.05±0.04.g/24h)、(79.93±11.52μmol/L)；I期IMN組、

7、II期IMN組和III+IV期IMN組24小時尿蛋白定量分別為：(5.02±2.14 g/24h)、(7.39±2.54 g/24h)、(9.53±3.78 g/24h)；I期IMN組、II期IMN組和III+IV期IMN組血肌酐水平分別為：(74.65±13.47μmol/L)、(100.34±39.66μmol/L)、(151.68±34.65μmol/L)。 2 免疫組織化學(xué)結(jié)果：(1)ezrin在IMN組、對照組腎小球壁層、臟層

8、上皮細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞均有表達(dá)，在腎小球主要表達(dá)于足細(xì)胞。I期IMN組、II期IMN組和III+IV期IMN組腎小球ezrin表達(dá)的EI值分別為：(8.36±1.75)、(5.61±1.64)、(3.47±0.76)，均較對照組(10.79±1.85)顯著降低(P均＜0.01)；I期IMN組、II期IMN組與III+IV期IMN組腎小球足細(xì)胞ezrin的表達(dá)依次逐漸降低，各組間表達(dá)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。(2)WT1在I

9、MN組、對照組腎小球足細(xì)胞細(xì)胞核及胞漿內(nèi)表達(dá)。I期IMN組、II期IMN組腎小球內(nèi)WT1表達(dá)的EI值分別為(7.31±2.76)、(9.25±4.02)與對照組(9.42±4.38)比較均無明顯變化(P均＞0.05)；I期IMN組、II期IMN組和對照組腎小球WT1表達(dá)的EI值均顯著高于III+IV期IMN組(3.71±0.66)(P均＜0.01)。 3.免疫組化結(jié)果與臨床指標(biāo)相關(guān)性分析：IMN患者腎小球ezrin的表達(dá)水平與2

10、4小時尿蛋白定量負(fù)相關(guān)(r=-0.615，P＜0.01)，與血肌酐負(fù)相關(guān)(r=-0.395，P=0.028)。IMN患者腎小球WT1的表達(dá)與尿蛋白定量、血肌酐均無相關(guān)性(r值分別為-0.178、-0.256，P值均＞0.05)。 結(jié)論 1 提示ezrin在IMN的早期即可反映足細(xì)胞的損傷，且能反映出IMN病理發(fā)展過程中足細(xì)胞受損的嚴(yán)重程度，因而ezrin有可能成為判斷IMN足細(xì)胞損害的免疫組化敏感指標(biāo)。 2 IMN忠者腎小球內(nèi)e