Tim-3在腎小球疾病中的表達(dá)及意義.pdf

1、本文對(duì)Tim-3在腎小球疾病中的表達(dá)及意義進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：Tim-3在IgA腎病中的表達(dá)及意義。
　　目的：免疫球蛋白A腎?。↖mmunoglobulin A nephropathy，IgAN）是一種自身免疫性疾病，是原發(fā)性腎小球腎炎的常見類型，全球發(fā)病率在2％至52％之間。細(xì)胞免疫和體液免疫異常在IgAN的發(fā)生發(fā)展中起了重要作用，T細(xì)胞功能紊亂及Thl/Th2細(xì)胞比例的失衡也參與了IgAN發(fā)

2、生發(fā)展。人類T細(xì)胞免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和黏蛋白(T-cell immunoglobulin and mucin domain protein，Tim)家族是新型免疫調(diào)節(jié)分子，該家族位于人類第5號(hào)染色體上。Tim-3特異性表達(dá)在活化的Thl細(xì)胞的表面。隨著研究的深入，目前人們發(fā)現(xiàn)Tim-3不僅表達(dá)于活化的Thl細(xì)胞，也表達(dá)于CTL、DC和NK細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞，在感染、腫瘤及器官移植后排斥反應(yīng)等多種免疫相關(guān)疾病中發(fā)揮重要作用。免疫相關(guān)性疾病主

3、要是由于機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能異常導(dǎo)致相應(yīng)組織及器官損害所引起的疾病，自身免疫性疾病是機(jī)體對(duì)自身的抗原發(fā)生免疫反應(yīng)從而導(dǎo)致自身組織的損害而引起的疾病。許多的研究表明，Tim-3影響慢性自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，如多發(fā)性硬化癥(Multiple Sclerosis)，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis）。一些研究表明，Tim-3在免疫球蛋白IgAN患者外周血單核細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子(Peripheral blood monon

4、uclear cell-associated cytokines，PBMC)中表達(dá)。但到目前為止，沒(méi)有對(duì)Tim-3在腎組織中表達(dá)的研究報(bào)道，并且在IgAN中并沒(méi)有進(jìn)行患者和正常腎組織患者之間的比較。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外關(guān)于Tim家族基因及蛋白是否參與IgAN的發(fā)生發(fā)展鮮有報(bào)道，因此，在此研究中，研究者采用病例對(duì)照研究的方法，從血清學(xué)和病理學(xué)兩個(gè)層次來(lái)進(jìn)行探討，測(cè)定IgAN患者和無(wú)IgAN的患者腎組織Tim-3表達(dá)的差異，分析Tim-3血清水平

5、病理學(xué)水平與IgAN活動(dòng)度之間的關(guān)系。
　　方法：納入2010年11月到2013年10月，在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院腎臟內(nèi)科就診的71例IgAN患者（26男和45女，平均年齡31.5士6.1歲，均滿18周歲），所有患者的腎小球?yàn)V過(guò)率(Glomerular filtration rate，GFR)≥90毫升/分鐘/1.73平方米。因?yàn)門im-3已被多次證實(shí)與哮喘等過(guò)敏性疾病相關(guān)，我們排除了與過(guò)敏相關(guān)的疾?。ㄈ缦蜻^(guò)敏性鼻炎）以及給予免疫調(diào)

6、節(jié)治療的患者。所有入選對(duì)象無(wú)糖尿病，肝功能異常及異常脂蛋白血癥。選取同一時(shí)間在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院泌尿外科住院的13例患者（手術(shù)及病理證實(shí)為腎錯(cuò)構(gòu)瘤）作為對(duì)照組（5男8女，平均年齡34.1±6.0年），對(duì)照組所有患者年齡均超過(guò)18歲，GFR≥90毫升/分鐘/1.73平方米，對(duì)照組所有入選者均無(wú)糖尿病、肝功能障礙、異常脂蛋白血癥、哮喘或過(guò)敏性鼻炎等過(guò)敏性疾病的病史。IgAN組和對(duì)照組患者，在入院后的第二天早晨空腹抽取外周血，測(cè)定紅細(xì)胞沉降率（

7、Erythrocyte sedimentation rate，ESR），C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)，紅細(xì)胞數(shù)（Red blood cell count，RBC），白細(xì)胞數(shù)(White blood cell count，WBC)，血小板數(shù)(Platelet count，PLT)，IgA的血清濃度，24小時(shí)蛋白尿(Proteinuria)。告知IgAN組患者腎活檢的必要性和風(fēng)險(xiǎn)，簽署知情同意書后，所有患者接

8、受經(jīng)皮腎穿刺活檢術(shù)(Percutaneous renal biopsy，PRB)并獲得腎組織病理標(biāo)本，檢測(cè)其中Tim-3的表達(dá)。對(duì)照組所有入選者接受腎錯(cuò)構(gòu)瘤(Renalangiomyolipoma)切除術(shù)，選取錯(cuò)構(gòu)瘤旁正常腎組織，病理證實(shí)非錯(cuò)構(gòu)瘤結(jié)構(gòu)，檢測(cè)其中Tim-3的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴Tim-3在IgAN腎組織中的表達(dá):我們分析了71例IgAN和13例非IgAN患者腎組織切片，IgAN患者Tim-3蛋白的陽(yáng)性染色率為94.3

9、％(67/71)，對(duì)照組患者Tim-3蛋白的染色陰性率為84.6％。⑵IgAN的病理分級(jí)與Tim-3表達(dá)的關(guān)系:IgAN的病理分級(jí)與Tim-3的表達(dá)程度之間呈正相關(guān)。⑶IgAN患者腎組織中的Tim-3的表達(dá)程度與IgAN血清學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系:我們研究觀察Tim-3的表達(dá)強(qiáng)度與相關(guān)臨床指標(biāo)諸如ESR，CRP，RBC，WBC，PLT，IgA的血清濃度和蛋白尿之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Tim-3的表達(dá)程度與疾病的相關(guān)臨床指標(biāo)顯著相關(guān)(P＜0.001)。

10、
　　結(jié)論：IgAN是一種免疫相關(guān)性疾病，我們使用抗Tim-3抗體在IgAN患者中檢測(cè)到Tim-3在腎組織表達(dá)，并且與疾病的活動(dòng)性密切有關(guān)，但Tim-3幾乎不在良性腎腫瘤的腫瘤旁腎組織中表達(dá)。我們推測(cè)，高表達(dá)的Tim-3除了見于IgAN，也可能見于其他免疫相關(guān)性的腎病，可以通過(guò)使用多克隆抗體和/或單克隆抗體，或許有可能證實(shí)大多數(shù)腎臟疾病均有表達(dá)Tim-3的存在。
　　第二部分：Tim-3在狼瘡性腎炎中的表達(dá)及意義。
　

11、　目的：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）是一種多因素（遺傳、感染、藥物、性激素、環(huán)境、免疫反應(yīng)各環(huán)節(jié)）參與的特異性自身免疫性疾病。SLE的發(fā)展過(guò)程中有高達(dá)60％的患者出現(xiàn)腎臟受累，即發(fā)展為狼瘡性腎炎(lupus nephritis，LN)，LN的發(fā)病率存在著種族間的差異，中國(guó)相關(guān)研究專家調(diào)查發(fā)現(xiàn)，中國(guó)患者的發(fā)病率相對(duì)較高。LN是SLE的重要死因之一，也是患者發(fā)展為終末期腎病(end-st

12、age kidney disease，ESRD)的重要原因。免疫相關(guān)性疾病主要是由于機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能異常導(dǎo)致相應(yīng)組織及器官損害所引起的疾病，自身免疫性疾病是指機(jī)體對(duì)自身的抗原發(fā)生免疫反應(yīng)從而引起自身組織損害而導(dǎo)致的疾病。眾多研究表明，多種免疫調(diào)節(jié)分子在LN的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。Tim-3是Tim基因家族的重要成員，該家族的基因位于人類第5號(hào)染色體上。其特異性表達(dá)在活化的Th1細(xì)胞的表面。隨著研究的深入，目前人們發(fā)現(xiàn)Tim-3不僅表達(dá)于

13、活化的Th1細(xì)胞，也表達(dá)于CTL、DC和NK細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞，在感染、腫瘤及器官移植后排斥反應(yīng)等多種免疫相關(guān)疾病中發(fā)揮重要作用。許多的研究表明，Tim-3影響慢性自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，如多發(fā)性硬化癥(MultipleSclerosis)，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis)。一些研究表明，Tim-3在IgAN患者外周血單核細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子(Peripheral blood mononuclearcell-as

14、sociated cytokines，PBMC)中表達(dá)。但到目前為止，沒(méi)有對(duì)Tim-3腎組織中的表達(dá)的研究報(bào)道，并且在LN中并沒(méi)有進(jìn)行患者和正常腎組織患者之間的比較。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外關(guān)于Tim基因和蛋白是否參與LN的發(fā)生發(fā)展少有報(bào)道，鑒于此，本研究將對(duì)LN患者血清學(xué)指標(biāo)、腎臟組織中Tim-3的表達(dá)、Tim-3的表達(dá)與LN臨床分級(jí)之間的關(guān)系及Tim-3表達(dá)與LN患者血清學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系進(jìn)行研究。
　　方法：在本研究中，65例LN患者作

15、為研究組（女性50例和男性15例，平均年齡（43.8±6.1）歲），所有患者就診于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院腎內(nèi)科，就診時(shí)間為2011年5月到2014年5月之間，參加本研究的患者已行腎活檢確診為狼瘡性腎炎，所有患者GFR≥90毫升/分鐘/1.73平方米，年齡均超過(guò)18歲，排除與過(guò)敏相關(guān)的疾?。ㄈ缦蜻^(guò)敏性鼻炎）及接受治療免疫調(diào)節(jié)治療，所有入選對(duì)象無(wú)糖尿病，肝功能異常及異常脂蛋白血癥。選取同一時(shí)間在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院泌尿外科住院的19例患者（手術(shù)及

16、病理證實(shí)為腎錯(cuò)構(gòu)瘤）作為對(duì)照組（5男14女，平均年齡42.1±5.7歲），對(duì)照組所有患者年齡均超過(guò)18歲，GFR≥90毫升/分鐘/1.73平方米，對(duì)照組所有入選者均無(wú)糖尿病、肝功能障礙、異常脂蛋白血癥、哮喘或過(guò)敏性鼻炎等過(guò)敏性疾病的病史。所有參加試驗(yàn)的患者，早晨空腹抽取外周血，檢測(cè)補(bǔ)體3(C3)，補(bǔ)體4(C4)，ESR，CRP，RBC，WBC，PLT，尿蛋白定量，抗雙鏈DNA抗體（抗dsDNA），抗Sm抗體，抗ANA抗體。LN組患者均簽

17、署知情同意書，接受經(jīng)皮腎穿刺活檢。在對(duì)照組中，所有入選者行腎錯(cuò)構(gòu)瘤切除術(shù)，采取毗鄰錯(cuò)構(gòu)瘤其組織學(xué)證實(shí)無(wú)錯(cuò)構(gòu)瘤病理診斷正常的腎組織。
　　結(jié)果：⑴反映LN活動(dòng)性的血清學(xué)指標(biāo)均高于非LN患者，并且兩個(gè)組之間的差異顯著。⑵Tim-3蛋白陽(yáng)性見于96.9％的LN患者(63/65)，但非LN患者94.7％的染色陰性(18/19)，對(duì)照組只有1例為Tim-3的陽(yáng)性染色。進(jìn)一步半定量免疫反應(yīng)性的H-得分測(cè)定Tim-3蛋白的表達(dá)，LN組Tim-3

18、得分明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑶病理表現(xiàn)的嚴(yán)重程度和Tim-3的表達(dá)程度之間呈正相關(guān)。⑷高免疫反應(yīng)的Tim-3與相關(guān)臨床指標(biāo)顯著相關(guān)(P＜0.001)，在對(duì)照組則無(wú)顯著的相關(guān)性。
　　結(jié)論：LN是一種免疫相關(guān)疾病，我們使用的抗Tim-3多克隆抗體來(lái)研究Tim-3在LN組和對(duì)照組中的表達(dá)，并證實(shí)，在LN患者腎組織中檢測(cè)到Tim-3的表達(dá)，并且與該疾病的活動(dòng)性相關(guān)。但良性腫瘤腎組織幾乎無(wú)Tim-3表達(dá)。因?yàn)榇蠖鄶?shù)腎臟疾病均與免