毛細管電泳在藥物篩選中的應用和技術開發(fā).pdf

1、毛細管電泳是一種高效、快速、微量的分離分析技術，在生物分析領域應用廣泛。本文利用毛細管電泳的技術特點將其應用于藥物篩選中，針對藥物活性篩選中的關鍵技術問題，如高效快速的篩選方法和新藥物靶點尋找，進行了一系列的新探索。
　　 首先，藥物活性篩選新方法的開發(fā)。對化合物進行活性篩選，主要是研究化合物與藥物靶點的相互作用。親和毛細管電泳是研究分子間相互作用的常用方法，以待測樣品的有效電泳淌度為參數(shù)計算分子間的結合常數(shù)。淌度的準確測定是該

2、方法的重要前提，但是由于受到溫度變化、電滲流波動等因素的影響，重現(xiàn)性較差，限制了其發(fā)展。本文在上述技術的基礎上，開發(fā)了一種壓力驅動的親和毛細管電泳方法，通過將氣壓推動過程和電泳過程相結合，有效的避免了因素的干擾，分析時間也大大縮短。采用該方法研究了8種具有不同pKa值、不同結合能力的藥物與牛血清白蛋白之間的結合情況，并計算了結合常數(shù)值。通過與傳統(tǒng)的熒光分光光度法的測定結果比較，驗證了該方法的可行性和準確性。同時，明確了該方法適用于研究結

3、合較弱的反應體系。
　　 其次，藥物結構篩選模型的建立。活性篩選是目前常用的篩選方法，但是因篩選指標單一，篩選結果具有誤導性，單純的增加篩選數(shù)量難以找到有活性又未知的化合物，因此篩選成本高，效率低。為此，本文探索了一種全新的結構篩選方法，以抗原特殊結構為核心，利用抗原和抗體特異性識別能力，篩選具有抗原類似結構的化合物。以抗真菌藥物棘球白素B的母核和其多克隆抗體為樣品，采用毛細管電泳配體分離法和激光誘導熒光檢測技術，通過研究二者的

4、結合行為，初步建立了以抗原有效電泳淌度變化為判斷依據(jù)的結構篩選模型。該模型旨在用于篩選具有潛在抗真菌活性的化合物。
　　 最后，藥物靶點發(fā)現(xiàn)方面的應用。差異蛋白質組學是發(fā)現(xiàn)藥物作用靶點的重要方法，二維凝膠電泳和質譜是分離和鑒定蛋白質的核心技術。經(jīng)二維凝膠電泳分離的蛋白質，在進入質譜之前需要長時間、繁瑣的樣品處理過程，難以滿足自動化的需要。針對該問題，本文在前人工作的基礎上，開發(fā)出一種集凝膠中蛋白質轉移和在線酶解的毛細管電泳方法。