大鼠脊髓半橫斷損傷后caspase-3的表達(dá)及其與神經(jīng)細(xì)胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、目的：細(xì)胞凋亡是脊髓繼發(fā)性損傷的主要方式。本課題建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，研究caspase-3在脊髓半橫斷損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的表達(dá)情況及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，以探討凋亡相關(guān)因子與脊髓修復(fù)的關(guān)系，以期為抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡，治療脊髓損傷提供理論依據(jù)。 方法：成年健康Wistar大鼠45只，隨機(jī)分為9組(每組5只)：假手術(shù)對(duì)照組、脊髓半橫斷損傷后6小時(shí)、1天、4天、7天、14天、21天、28天及35天組。脊髓半橫斷損傷動(dòng)物分別在損傷

2、后上述各時(shí)間點(diǎn)灌注取材，取材范圍為脊髓損傷位點(diǎn)上段1cm和下段1cm；假手術(shù)組分別在術(shù)后6小時(shí)、1天、7天、21天、28天灌注取材，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各1只動(dòng)物，取材范圍為椎板打開處脊髓上段1cm和下段1cm。冰凍切片，行TUNEL染色和抗caspase-3免疫組化SP法染色。光鏡下觀察結(jié)果，計(jì)數(shù)各組動(dòng)物脊髓腹角中caspase-3免疫組化陽性神經(jīng)元數(shù)和TLINEL陽性神經(jīng)元數(shù)。根據(jù)數(shù)據(jù)資料的特征采用方差分析、t檢驗(yàn)，對(duì)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

3、 結(jié)果： 1．TLINEL染色：損傷后6h，脊髓腹角開始出現(xiàn)較多的TUNEL陽性神經(jīng)細(xì)胞，之后持續(xù)至少5周。在上段脊髓損傷側(cè)，與假手術(shù)組比較，腹角TUNEL陽性神經(jīng)元數(shù)都增加，其中損傷后4天～35天組，有顯著性差異，4天時(shí)為高峰；在損傷側(cè)下段脊髓，與假手術(shù)組比較，腹角TUNEL陽性神經(jīng)元數(shù)都增加，其中損傷6小時(shí)～14天組，有顯著性差異，1天時(shí)為高峰。 2．抗caspase-3免疫組化染色：caspase-3免疫陽性反

4、應(yīng)物主要定位于脊髓腹角神經(jīng)元胞漿和突起的根部，胞核有時(shí)也有表達(dá)。上段脊髓損傷側(cè)，除了35天組，各時(shí)間點(diǎn)的陽性神經(jīng)元數(shù)，與假手術(shù)組比較，都增加且：P<0.05；損傷側(cè)下段脊髓，除了21天組，各時(shí)間點(diǎn)的陽性神經(jīng)元數(shù)，與假手術(shù)組比較，都增加且P<0.05。 結(jié)論：大鼠脊髓半橫斷損傷后35天內(nèi)，與假手術(shù)組相比較，上下段脊髓損傷側(cè)腹角TUNEL陽性神經(jīng)元數(shù)和caspase-3免疫陽性神經(jīng)元數(shù)均增多；TLINEL檢測(cè)凋亡細(xì)胞與caspase