核盤菌弱毒菌株SX276生物學(xué)特性及其攜帶RNA病毒的研究.pdf

1、核盤菌是一種寄主范圍十分廣泛、危害特別嚴(yán)重的植物病原真菌，全世界每年因其引致的菌核病而造成的經(jīng)濟(jì)損失十分慘重。真菌病毒是一類寄生真菌的病毒，其中一些真菌病毒能夠引起真菌寄主致病力衰退，具有很好的生物防治潛力而備受關(guān)注。因此，在核盤菌中篩選和挖掘弱毒資源，不僅可以為核盤菌菌核病的防治提供新思路，同時(shí)也有利于探究真菌病毒的分類與進(jìn)化、真菌病毒與寄主之間的互作機(jī)制。
　　分離采集自陜西省的1063個(gè)核盤菌菌核進(jìn)行純培養(yǎng)，從中篩選出100

2、株菌落形態(tài)異常的菌株進(jìn)行宏轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，結(jié)果檢測(cè)到49種不同病毒的信息，其中病毒核盤菌彈狀病毒1（Sclerotinia sclerotiorum Rhabdovirus1，SsRhV1）存在于菌株SX276中。相對(duì)于菌株Ep-1PNA367，菌株SX276菌落形態(tài)異常、生長(zhǎng)速度慢、致病力完全喪失。進(jìn)一步對(duì)菌株SX276中是否含有其它類型病毒進(jìn)行了分析，證實(shí)菌株SX276攜帶有4種不同類型的病毒，分別是病毒SsRhV1、內(nèi)源病毒SsEV2

3、(Sclerotiniasclerotiorum endornavirus2)、弱毒病毒SsHV1-like(Sclerotinia sclerotiorum hypovirus1-like)及雙節(jié)段病毒SsBRV2(Sclerotinia sclerotiorum botytivirus2)。
　　在真菌中首次發(fā)現(xiàn)隸屬于彈狀病毒科的負(fù)義鏈RNA病毒。病毒SsRhV1，基因組大小為11356nt，基因組5'末端沒(méi)有帽子結(jié)構(gòu)，3'末

4、端也沒(méi)有poly A尾巴，且5'末端序列和3'末端序列反向互補(bǔ)。病毒SsRhV1基因組推定出5個(gè)線性排布的非重疊開放閱讀框（open reading frame，ORF），其中ORF1/4/5推定編碼的蛋白序列與彈狀病毒科病毒的N/G/L蛋白有同源性，但是ORF2/3編碼蛋白未在病毒數(shù)據(jù)庫(kù)中發(fā)現(xiàn)同源序列。病毒SsRhV1的基因間隔區(qū)序列是一串富含A/U且相對(duì)保守的序列，分析發(fā)現(xiàn)病毒的終止密碼子為UAA，終止序列為AUAUAA，起始密碼子

5、為AUG，起始序列為UCA(U/C/A)(U/C/A)AUG，基因的終止信號(hào)和起始信號(hào)相互交匯，重合的序列正是富含A/U的保守序列，這段保守序列中包含病毒SsRhV1的TTP保守結(jié)構(gòu)域序列AAA(A/G)A以及TI保守結(jié)構(gòu)域序列AACAGA。系統(tǒng)發(fā)育分析表明病毒SsRhV1與動(dòng)物彈狀病毒親緣關(guān)系較近，但獨(dú)立聚類一個(gè)遺傳分支，建議以該病毒為模式種建立一個(gè)新的病毒屬。病毒SsRhV1的病毒粒子可能呈線狀，直徑在30 nm左右，長(zhǎng)度在500n

6、m-1200nm不等，病毒粒子表面光滑沒(méi)有看見明顯的突起結(jié)構(gòu)。病毒SsRhV1的傳毒效率極低，沒(méi)有獲取傳毒成功的轉(zhuǎn)化子。通過(guò)脫毒的方法，推測(cè)病毒SsRhV1/SX276可能對(duì)寄主核盤菌的生物學(xué)特性產(chǎn)生一定的影響。
　　病毒SsEV2基因組具有其獨(dú)特性，且該病毒與寄主弱毒特性相關(guān)。根據(jù)獲得的SsEV2部分cDNA序列(11586nt)，證實(shí)該病毒基因組含有2個(gè)推定的完整非重疊ORF，其中ORF1編碼蛋白含有3486個(gè)氨基酸，ORF2

7、編碼蛋白含有290個(gè)氨基酸，ORF1和ORF2之間的間隔序列長(zhǎng)度為206 bp。在病毒SsEV2的ORF1編碼蛋白上預(yù)測(cè)出5個(gè)保守的基序(motif)，依次為甲基轉(zhuǎn)移酶(MTR)、富含半胱氨酸區(qū)域(CRR)、兩個(gè)解旋酶(DExH和HEL)和S7，而ORF2編碼含有8個(gè)保守氨基酸位點(diǎn)或結(jié)構(gòu)域的依賴于RNA的RNA聚合酶(RdRp)。系統(tǒng)發(fā)育分析表明病毒SsEV2與真菌內(nèi)源病毒有同源性，但結(jié)合其基因組獨(dú)特性(含有兩個(gè)ORF)，推定是一個(gè)新的