禾谷絲核菌弱毒菌株中的真菌病毒研究.pdf

1、真菌病毒(mycovirus)普遍存在于各類真菌中，并且能夠在真菌體內(nèi)進(jìn)行有效復(fù)制。目前報(bào)道的真菌病毒主要分屬于14個(gè)科以及一部分未分類真菌病毒，其基因組核酸類型包括dsRNA、(+)ssRNA、(-)ssRNA和ssDNA。大部分真菌病毒對(duì)宿主都沒(méi)有顯著的影響。近年來(lái)在多種植物病原真菌中發(fā)現(xiàn)的許多弱毒相關(guān)的真菌病毒，為真菌病害的生物防治提供了豐富的資源。
　　絲核菌中的禾谷絲核菌(Rhizoctonia cerealis Van

2、 der Hoeven)屬于雙核絲核菌的AG-D融合群，是引起我國(guó)小麥紋枯病的優(yōu)勢(shì)種群。研究發(fā)現(xiàn)R.cerealis一些菌株中的dsRNA存在豐富的多樣性。但是由于大多數(shù)dsRNA對(duì)宿主沒(méi)有明顯的影響，目前對(duì)于絲核菌尤其是雙核的禾谷絲核菌中的真菌病毒的研究還很少。根據(jù)對(duì)弱致病力菌株中提取的dsRNA高通量測(cè)序分析顯示，在禾谷絲核菌中包含多種真菌病毒相關(guān)的序列。探索這些序列與弱毒菌株及其弱致病力之間的關(guān)系，明確其與真菌毒力衰退之間的關(guān)系，

3、能夠?yàn)榘l(fā)掘有生防潛力的病毒提供有價(jià)值的線索。
　　本研究對(duì)采自我國(guó)山東的一株禾谷絲核菌弱致病力菌株R1084進(jìn)行了研究。結(jié)合高通量測(cè)序結(jié)果，通過(guò)克隆測(cè)序和RACE方法獲得了線粒體病毒Rhizoctonia cerealismitovirus1-R1084(RcMV1-R1084)的基因組序列并作了初步分析。RcMV1-R1084全長(zhǎng)3149bp，G+C含量40.3％，5'UTR533nts，3'UTR為177nts，沒(méi)有poly(

4、A)尾巴。無(wú)論使用真菌線粒體遺傳密碼還是通用密碼子，RcMV1-R1084都編碼一個(gè)相同的ORF，該ORF長(zhǎng)度2439bp，編碼812個(gè)氨基酸，分子量為91.27 kDa，包含一個(gè)線粒體病毒的RdRp保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)發(fā)育分析表明RcMV1-R1084的RdRp與Sclerotiniasclerotiorum mitovirus11相似度最高，具有50％的氨基酸序列相似度。這是真菌線粒體病毒在R.cerealis中的首次發(fā)現(xiàn)。
　　

5、對(duì)禾谷絲核菌弱致病力菌株R10125中兩個(gè)病毒的部分基因組序列進(jìn)行了驗(yàn)證，初步推斷它們可能分別屬于線粒體病毒(Mitovirus)和低毒病毒（Hypovirus），暫時(shí)命名為RcMV2/R10125和RcHV1/R10125。其中RcMV2/R10125具有完整的ORF和一個(gè)RdRp保守結(jié)構(gòu)域;與RcMV1-R1084的序列差異較大;而RcHV1/R10125還有可能比較長(zhǎng)的一段基因組序列尚未獲得。推測(cè)在R10125和R1084中可能存

6、在多個(gè)線粒體病毒、低毒病毒以及其它病毒共同侵染同一菌株的情況，其中可能就包含具有毒力衰退相關(guān)的真菌病毒。
　　對(duì)弱致病力菌株R1084和R10125毒力衰退的原因進(jìn)行初步探索。分析了R1084和R10125菌尖分離后代以及強(qiáng)致病力菌株R0301和中等致病力菌株R0959與R1084和R10125對(duì)峙培養(yǎng)后的一些生物學(xué)性狀。結(jié)果表明R10125菌尖分離的后代菌株的菌落形態(tài)、菌絲形態(tài)，生長(zhǎng)速率都明顯恢復(fù)，對(duì)苗期小麥的致病力有一定程度的