平菇dsRNA病毒與脫毒菌株的研究.pdf

1、本研究利用dsRNA技術(shù)，從平菇天達(dá)300菌絲體中提取出平菇dsRNA病毒的基因組，共有4個(gè)片段，大小分別為8.2kb，2.6kbp，2.0kbp，1.1kbp(根據(jù)BioCaptMW軟件計(jì)算)；酶切驗(yàn)證4個(gè)片段均為dsRNA，其中8kbp為doublet。 利用一步RT-PCR對(duì)dsRNA病毒的部分基因組進(jìn)行了克隆、測(cè)序，從8.2kb、2.6kb中擴(kuò)增出的目的片段，大小分別為為556bp和351bp，經(jīng)過(guò)blast、保守序列比

2、對(duì)分析，來(lái)自2.6kp的556bp序列與Pleurotus ostreatus virus，(PoV I)編碼的RdRp基因有很高的相似性，核苷酸的相似性為86％，翻譯為蛋白質(zhì)的相似性為94％，其中10個(gè)不同的氨基酸中有9個(gè)不在RdRp保守區(qū)域內(nèi)，只有一個(gè)在V保守區(qū)。在這10個(gè)氨基酸中，有7個(gè)是保守替代殘基。因此2.6kb序列編碼RdRp與雙分體基因組分病毒科(Partitiviridae)的成員相似，提取的dsRNA病毒可能屬于雙分體

3、基因組病毒科(Partitiviridae)。 通過(guò)CsCl梯度離心，提取到兩種大小、形狀不同的病毒顆粒：直徑為27～28nm，形狀為等軸狀；直徑為22～24nm，形狀為球形顆粒。平菇直徑22～24nm球形顆粒病毒屬首次報(bào)道。 采用高溫33℃培養(yǎng)重復(fù)切取尖端菌絲的方法對(duì)平菇天達(dá)300進(jìn)行脫毒，結(jié)果表明，脫毒菌株日平均生長(zhǎng)速度是出發(fā)菌株的1.2倍，搖瓶培養(yǎng)菌絲生物量顯著提高，是出發(fā)菌株的2.8倍。脫毒菌株第一茬菇產(chǎn)量與出發(fā)