核盤菌病毒多樣性及兩個(gè)新型RNA病毒分子特性分析.pdf

1、核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.) de Bary)是一種重要的植物病原真菌，具有廣泛的地理分布和多樣化的寄主范圍。真菌病毒可以引起植物病原真菌的弱毒特性，具有防治植物真菌病害的潛力。核盤菌中存在豐富的病毒資源，利用弱毒相關(guān)病毒防治核盤菌，是菌核病新的潛在生物防治策略之一。本研究通過(guò)篩選核盤菌異常菌株，利用高通量測(cè)序等技術(shù)對(duì)核盤菌攜帶病毒多樣性進(jìn)行分析，獲得了以下研究結(jié)果。
　　對(duì)采集自湖南省、黑

2、龍江省和內(nèi)蒙古自治區(qū)的1800份核盤菌菌核進(jìn)行純培養(yǎng)，篩選獲得菌落形態(tài)異常的菌株125株。生物學(xué)測(cè)定結(jié)果顯示篩選的大部分菌株生長(zhǎng)速度緩慢，致病力出現(xiàn)不同程度的衰退。高通量測(cè)序分析表明125株異常菌株中攜帶的病毒種類豐富，且多數(shù)為未曾報(bào)道或分類地位不確定的新病毒。病毒核酸類型有正單鏈RNA(+ssRNA)病毒、負(fù)單鏈RNA(-ssRNA)病毒、雙鏈RNA(dsRNA)病毒、單鏈DNA(ssDNA)病毒，其中ssRNA病毒占80％，dsRN

3、A病毒占18％。除裸露病毒科病毒外，共獲得78個(gè)病毒單一序列信息，隸屬于19個(gè)已知病毒科和未分類病毒科。
　　菌株230氣生菌絲發(fā)達(dá)，不產(chǎn)生菌核，油菜葉片上不形成病斑，是一株典型弱毒菌株。從中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的多股負(fù)義鏈RNA病毒，命名為Sclerotinia sclerotiorumMirafiore lettuce virus-like(SsMiLV)。SsMiLV-RNA1基因組為7832nt，包含兩個(gè)推定的開放閱讀框（open

4、 reading frame，ORF），ORF2編碼一個(gè)分子量為269KD的假定蛋白，該假定蛋白具有RdRp保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)發(fā)育分析表明該病毒是蛇形病毒科的新成員，但在遺傳進(jìn)化上與已報(bào)道的蛇形病毒科（Ophioviridae）病毒存在一定遺傳距離，與真菌立枯絲核菌中發(fā)現(xiàn)的真菌病毒聚成一簇。據(jù)此研究結(jié)果，建議將蛇形病毒科分成兩個(gè)不同的屬，一個(gè)寄主為植物，另一個(gè)寄主為真菌，以便更好地區(qū)分不同病毒的特點(diǎn)。
　　弱毒菌株767生長(zhǎng)速度緩慢

5、，產(chǎn)生黃色色素，不形成菌核，致病力喪失。初步研究發(fā)現(xiàn)菌株767含有一種新型RNA病毒，命名為Sclerotinia sclerotiorum Norovirus(SsNorV)，其RdRp與Bat norovirus具有24％相似性。SsNorV的基因組為11024nt，編碼兩個(gè)ORF，含有一個(gè)RdRp保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示該病毒與星狀病毒科聚成一簇，但獨(dú)立形成一支，建議以該病毒為模式種建立一個(gè)新的病毒屬。
　　SsMiLV