豐花月季愈傷組織誘導(dǎo)與原生質(zhì)體培養(yǎng)的研究.pdf

1、豐花月季系薔薇科薔薇屬多年生木本花卉，是現(xiàn)代城市綠化中不可替代的材料。我國北方由于氣溫低，缺乏可以廣泛栽培并能露地越冬的豐花月季品種。當(dāng)前在月季育種中存在的突出問題是現(xiàn)代月季遺傳背景狹窄，傳統(tǒng)育種方法周期過長，而且染色體數(shù)目及倍性差異造成遠(yuǎn)緣雜交不親和與雜種的高度不育。而生物工程則為生物品種的改造開辟了新途徑，把某些抗性或其他優(yōu)良性狀基因?qū)朐瓉聿痪邆溥@些性狀的生物體內(nèi)，可以在較短時間達(dá)到改良品種的目的。本研究探討了豐花月季愈傷組織誘導(dǎo)

2、的影響因素，利用獲得的胚性愈傷組織建立了細(xì)胞懸浮系。在此基礎(chǔ)上以胚性愈傷組織、懸浮細(xì)胞和葉片為游離材料，探討了豐花月季原生質(zhì)體分離培養(yǎng)的影響因素，旨在建立起豐花月季原生質(zhì)體分離培養(yǎng)再生體系，為以后導(dǎo)入抗寒等目的基因及細(xì)胞融合等遺傳操作，最終創(chuàng)造優(yōu)良的品種打下良好的基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下： 1.建立了豐花月季微繁體系：最佳腋芽萌發(fā)及增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/1+NAA0.05mg/l，能適合四種豐花月季基因型的擴繁

3、，增殖倍數(shù)均在3.8以上；最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.05mg/l。 2.采用豐花月季幼葉、幼莖、不成熟種子和不成熟胚誘導(dǎo)愈傷，發(fā)現(xiàn)豐花月季8號幼葉最佳愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2,4-D2.0mg/l+TDZ0.5mg/l+L-脯氨酸300mg/l+蔗糖30g/l.且在暗中誘導(dǎo)，最佳愈傷繼代增殖培養(yǎng)基為MS+2,4-D1.0mg/l+TDZ0.5mg/l，繼代2～3次后獲得胚性愈傷；幼莖不適合愈傷組織的誘導(dǎo)。豐花月季1號

4、不成熟種子最佳胚性愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2,4-D3.0mg/l，繼代在MS+2,4-D0.5mg/l培養(yǎng)基上形成子葉狀體胚結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基MS+6-BA1.0mg/l+IBA0.1mg/l上分化出不定芽；不成熟胚愈傷誘導(dǎo)效果差。不同豐花月季基因型在愈傷組織誘導(dǎo)方面有顯著差異。 3.建立了豐花月季胚性細(xì)胞懸浮系：懸浮系初始培養(yǎng)時要每4～5天繼代一次，穩(wěn)定后8～10天繼代一次，最佳接種量為1ml密實體積懸浮細(xì)胞/40ml培養(yǎng)液。

5、不同基因型間豐花月季懸浮系生長特性差異不顯著。 4.從幼葉、胚性愈傷組織及懸浮細(xì)胞系分離得到原生質(zhì)體。豐花月季葉片原生質(zhì)體游離的最佳酶液組成為2.0％CellulaseOnozukaR-10+1.0％Hemicellulase+0.05％PectolyaseY-23+0.1％MacerozymeR-10+0.7M甘露醇，酶解14h；胚性愈傷組織原生質(zhì)體游離的最佳酶液組成為1.0％～2.0％CellulaseOnozukaR-10

6、+1.0％Hemicellulase+0.1％PectolyaseY-23+0.05％MacerozymeR-10+0.6M甘露醇，酶解16h；懸浮細(xì)胞原生質(zhì)體游離的最佳酶液組成為2.0％CellulaseOnozukaR-10+1.0％Hemicellulase+0.1％～0.3％PectolyaseY-23+0.1％MacerozymeR-10+0.6M甘露醇，酶解16h。 5.材料生理狀態(tài)及其預(yù)處理對原生質(zhì)體分離有影響：幼