臍血與成人外周血樹突狀細(xì)胞表型和功能的比較研究.pdf

1、中山大謦碩士學(xué)位論文y767239臍血與成人外周血樹突狀細(xì)胞表型和功能的比較研究專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)碩士研究生：林’勝謀導(dǎo)師：方群教授答辯委員會(huì)主席：答辯委員會(huì)成員：鋤甥硼％、；：知衙”瓤列2005年5月廣州臍呲與成人外周血樹突狀細(xì)胞表型和功能的比較研究中文摘要材料與方法1研究對(duì)象本實(shí)驗(yàn)共收集足月健康新生兒臍血15例，健康成人外周血20例。2樹突狀細(xì)胞的分離與培養(yǎng)本實(shí)驗(yàn)采用密度梯度離心法分離臍血(或外周血)單個(gè)核細(xì)胞，培養(yǎng)2h后取粘附細(xì)胞在含

2、rhGMCSF和rhIL一4的RPMll640培養(yǎng)液中培養(yǎng)。第6天加入TNFq刺激24h。3淋巴細(xì)胞的分離及保存非粘附細(xì)胞以含rhlL2的RPⅦ1640培養(yǎng)，作為反應(yīng)細(xì)胞。4DC表面標(biāo)志分析第7天流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC表型分子CD83、CD86和HLA—DR的表達(dá)。5混合淋巴反應(yīng)培養(yǎng)7天后經(jīng)絲裂霉素處理過(guò)的DC和自體／異體淋巴細(xì)胞按20：l的比率混合培養(yǎng)72h，MTT(噻唑藍(lán))法檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，計(jì)算DC的刺激指數(shù)(SI)。結(jié)果1樹突狀

3、細(xì)胞的鑒定培養(yǎng)第7天，倒置顯微鏡下見臍血或外周血誘導(dǎo)的細(xì)胞均表現(xiàn)出典型的樹突狀細(xì)胞形態(tài)。透視電鏡可見細(xì)胞膜大量皺褶和不規(guī)則突起：細(xì)胞體積顯著增大，胞漿中富含線粒體。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示兩組DC均高度表達(dá)HLADR(臍血962％60％，外周血955％32％)，中高度表達(dá)輔助刺激分子CD86(臍血646％83％，外周血795％497％)，中低度表達(dá)樹突狀細(xì)胞特異性標(biāo)志CD83(臍血309％82％，外周血346％97％)；而單核細(xì)胞特異性標(biāo)志C